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国家高技术研究发展计划(2011AA100602)

作品数:5 被引量:36H指数:2
相关作者:马晴雯舒娟曾凡一张雪洪刘浏更多>>
相关机构:卫生部上海交通大学上海市儿童医院更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 5篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 4篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 2篇特异
  • 1篇动物
  • 1篇多基因
  • 1篇多顺反子
  • 1篇血管
  • 1篇血管性血友病
  • 1篇血管性血友病...
  • 1篇血友病
  • 1篇血友病因子
  • 1篇整合酶
  • 1篇整合型
  • 1篇人凝血因子
  • 1篇人凝血因子V...
  • 1篇乳腺
  • 1篇乳腺表达
  • 1篇顺反子
  • 1篇特异表达
  • 1篇凝血
  • 1篇凝血因子
  • 1篇胚胎

机构

  • 4篇上海交通大学
  • 4篇卫生部
  • 2篇上海市儿童医...
  • 1篇上海交通大学...
  • 1篇上海滔滔转基...

作者

  • 2篇马晴雯
  • 1篇黄英
  • 1篇蔡勤
  • 1篇曾溢滔
  • 1篇任晓叶
  • 1篇周在威
  • 1篇张雪洪
  • 1篇曾凡一
  • 1篇王晴
  • 1篇张俨
  • 1篇龚秀丽
  • 1篇舒娟
  • 1篇任晓叶
  • 1篇刘浏

传媒

  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇医学分子生物...
  • 1篇Scienc...
  • 1篇中国医药生物...
  • 1篇中国科学:生...

年份

  • 5篇2014
  • 1篇2012
5 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
利用自裂解多肽T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因共同表达被引量:1
2014年
目的:探讨利用自裂解多肽2A构建的多顺反子载体能否在牛耳皮肤成纤维细胞中实现多基因的有效表达。方法:利用来自一点褐翅蛾病毒(TaV)的2A元件(T2A)将GFP和Neo基因连接到同一载体中,构建pCMV-GFP-T2A-Neo质粒,将其转染牛耳皮肤成纤维细胞,以FACS检测GFP基因的表达,RT-qPCR检测GFP、T2A和Neo的表达。结果:由T2A连接的GFP和Neo基因在mRNA水平上都有显著表达,且表达水平相当。结论:以T2A连接的基因在转入细胞后能正常翻译和表达,显示T2A在牛耳皮肤成纤维细胞中具有自裂解功能,可作为一种构建多顺反子载体的有效工具用于牛耳皮肤成纤维细胞的基因转移,为其将来在转基因牛研制中的应用奠定了基础。
张俨马晴雯
转基因动物乳汁中高效、稳定表达人FVⅢ的研究
人凝血因子VIII(hFVIII)是一种重要的凝血蛋白,它的缺失或缺乏会导致血友病A。目前血友病A的治疗方法主要是注射给病人重组凝血因子VIII蛋白或来源于血浆的VIII因子浓缩产品。但目前这些方法存在病毒污染、产量低、...
任晓叶
关键词:人凝血因子VIII血友病乳腺表达血管性血友病因子转基因动物
文献传递
位点特异整合型微环DNA的构建及应用被引量:2
2014年
目的联合应用LR克隆酶和链霉菌噬菌体ΦC31整合酶系统,建立一种获得位点特异整合型微环DNA的方法,为该载体在转基因研究中的应用提供科学资料。方法应用分子克隆技术,在目的基因表达盒及链霉菌attB位点两端接入λattR和λattL片段,随后插入ΦC31整合酶基因表达盒,构建可获得微环DNA的亲本质粒。该亲本质粒上的λattL和λattR序列可在LR克隆酶的催化下重组生成表达ΦC31整合酶的微质粒和含有目的基因表达盒及attB位点的微环DNA。以限制性内切酶酶切、定性以及定量PCR分析其重组效率。并将未经纯化的LR重组体系转染HeLa细胞,以流式细胞技术、克隆计数、ELISA等方法检测其转染率、整合率及目的蛋白表达水平,并与传统质粒进行比较。结果 LR克隆酶可有效催化亲本质粒的重组,重组率达80%以上。重组体系中的微环DNA和微质粒无需纯化即可成功转染HeLa细胞,且其转染率、整合率以及目的蛋白表达水平均高于传统质粒。结论建立了一种高效、快速获得位点特异整合型微环DNA的方法。
刘浏周在威马晴雯
Cryopreservation of mammalian oocytes and embryos: current problems and future perspectives被引量:20
2014年
Cryopreservation techniques for mammalian oocytes and embryos have rapidly progressed during the past two decades,emphasizing their importance in various assisted reproductive technologies.Pregnancies and live births resulting from cryopreserved oocytes and embryos of several species including humans have provided proof of principle and led to the adoption of cryopreservation as an integral part of clinical in vitro fertilization.Considerable progress has been achieved in the development and application of the cryopreservation of mammalian oocytes and embryos,including preservation of the reproductive potential of patients who may become infertile,establishment of cryopreserved oocyte banks,and transport of oocytes and embryos internationally.However,the success rates are still far lower than those obtained with fresh oocytes and embryos,and there are still obstacles that need to be overcome.In this review,we address the major obstacles in the development of effective cryopreservation techniques.Such knowledge may help to eliminate these hurdles by revealing which aspects need improvement.Furthermore,this information may encourage further research by cryobiologists and increase the practical use of cryopreservation as a major part of assisted reproductive technologies for both humans and animal species.
MOUSSA MahmoudSHU JuanZHANG XueHongZENG FanYi
关键词:CRYOPRESERVATIONMAMMALSOOCYTES
哺乳动物卵母细胞和胚胎冷冻保存研究进展:现存问题与未来展望被引量:13
2014年
在过去的几十年中,哺乳动物卵母细胞和胚胎冷冻保存技术因在辅助生殖技术及实际生产中应用广泛,其研究发展尤为迅速.多个物种(包括人)的卵母细胞和胚胎冷冻保存研究获得了受孕和活产的成功佐证,为冷冻保存技术的临床应用提供了理论依据,并成为体外受精不可缺少的环节.尽管哺乳动物卵母细胞和胚胎的冷冻保存技术的研发和应用取得了巨大进展,例如为可能不育的患者贮藏生殖潜能、卵子冻存库的建立以及卵母细胞和胚胎的跨国运输,但成功率仍达不到使用新鲜卵母细胞和胚胎的水平,还存在许多难题有待解决.本文针对低温保存技术中制约冷冻效率和成功率的主要问题进行了综述,旨在解决技术研发中遇到的瓶颈,为改进技术提供借鉴和参考,鼓励低温生物学研究者继续开展深入研究,加快推进冷冻保存技术在人类和动物辅助生殖技术中的实际应用.
MOUSSA Mahmoud舒娟张雪洪曾凡一
关键词:冷冻保存哺乳动物卵母细胞胚胎
不同启动子引导的人凝血因子Ⅷ基因载体在HC11细胞和小鼠乳腺中表达的研究被引量:2
2012年
目的应用山羊β-酪蛋白基因启动子(P1A3),构建真核细胞表达人凝血因子Ⅷ(humancoagu—lationfactorⅧ,hFⅧ)全长cDNA载体(pcDNA3.1.P1A3-hFⅧ)和hFⅧB区缺失(humancoagulationfactorⅧB—domain.deleted,hFVⅧBD)的cDNA载体(pcDNA3.1-P1A3-hFⅧBD),研究它们在乳腺细胞中的表达情况,同时与巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子引导的相应的hFⅧ载体进行比较。方法采用常规DNA分子克隆技术构建人凝血因子Ⅷ(hFⅧ)基因载体,转染小鼠乳腺上皮细胞(HC-11),应用RT—PCR以及real—timePCR技术检测hFⅧ基因转录本;对NSL期母鼠乳腺注射DNA载体后,采集试验母鼠乳汁,应用ELISA检测乳腺细胞分泌hFⅧ蛋白的瞬时表达水平。结果应用构建的CMV启动子和P1A3启动子指导的hFⅧ基因载体转染HC-11细胞后,在mRNA水平均有表达;瞬时转染哺乳期母鼠的乳汁检测表明,转染CMV和P1A3启动子的hFⅧ载体的母鼠,乳汁中的hFⅧ蛋白表达量分别为2.81μg/ml(CMV—hFⅧBD),2.01μg/ml(CMV—hFⅧ),1.82μg/ml(P1A3-hFⅧBD),1.20μg/ml(P1A3.hFⅧ)。结论构建的乳腺特异性表达hFⅧ基因的载体,转染HC-11细胞和乳腺组织后的mRNA及蛋白表达水平均证实了该载体的有效性:CMV启动子引导的hFⅧ载体表达虽稍高于P1A3启动子载体,但由于后者具有乳腺特异表达的特点,更适用于乳腺生物反应器。我们构建hFⅧ基因的载体的经验,为乳腺生物反应器的研制提供了有价值的科学依据。
王晴任晓叶蔡勤龚秀丽黄英曾溢滔
关键词:启动子特异表达
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