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携带靶向沉默LSD1基因表达shRNA慢病毒载体的构建与鉴定: 2015年; 目的:构建慢病毒干扰LSD1表达的载体并鉴定。方法:设计并合成3对针对LSD1基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒连接,转化DH5a菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人胃癌MKN-28细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过real time-PCR法检测细胞中LSD1基因的表达水平。结果:经酶切鉴定筛选出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒构建成功;转染胃癌MKN-28细胞后,LSD1基因在mRNA水平的表达降低。结论:成功构建了靶向LSD1基因的shRNA慢病毒载体,并筛选出1种对LSD1基因有显著抑制作用的shRNA。; 李妍田昕孟凡东隋承光吴迪付立业刘云鹏姜又红; 关键词：RNA干扰胃癌

缺氧环境中Galectin-l对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭与凋亡的影响被引量：2: 2014年; 目的:探讨缺氧条件下Galectin-1对口腔鳞癌细胞Tca8113的生物学行为的影响。方法:siRNA干扰Galectin-1在Tca8113细胞中的表达;采用MTT法检测细胞的增殖;Real time-PCR分析Galectin-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;Transwell小室观察各组细胞的侵袭能力;免疫荧光分析缺氧条件下细胞的凋亡情况。结果:siRNA-Galectin-l干扰组和200μmol/L氯化钴处理组的细胞出现了增殖抑制;用200μmol/L氯化钴处理Tca8113细胞后,Galectin-l mRNA的表达量上调(0.91±0.11,P<0.05);siRNA+Tca8113细胞组Bcl-2 mRNA的表达量明显减低(0.16±0.02,P<0.05);siRNA-Galectin-l干扰组迁移出的细胞数(31±6)明显低于200μmol/L氯化钴+Tca8113细胞组(43±6)和Tca8113细胞组(51±8,P<0.05);免疫荧光结果所示,siRNA+200μmol/L氯化钴+Tca8113细胞组的荧光强度最弱。结论:Galectin-1是反应肿瘤细胞缺氧的一个较为敏感的指标,可利用Galectin-1作为内在的缺氧标志物。; 潘洪飞任大鹏孟凡东田昕李妍; 关键词：口腔鳞状细胞癌缺氧

shRNA干扰mTOR信号途径对口腔癌细胞的生物学影响: 2014年; 目的:探讨利用慢病毒介导shRNA干扰mT OR信号途径,对口腔腺样囊性癌细胞生物学的影响。方法:shRNA干扰mT OR、雷帕霉素处理口腔癌ACCM细胞株,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot法检测mT OR和Bcl-2蛋白的表达水平,real time PCR检测mT OR mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平。结果:细胞增殖情况,各不同刺激因素组与单纯ACCM细胞组比较增殖率降低(P<0.05)。不同刺激因素组细胞的凋亡率与单纯ACCM细胞组相比较,细胞凋亡率增高(P<0.05)。mT OR和Bcl-2的表达水平,雷帕霉素组和shRNA干扰mT OR组均低于单纯ACCM组(P<0.05)。结论:慢病毒介导的shRNA干扰信号途径,可影响口腔癌细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,抑制了抗凋亡基因Bcl-2的表达,为肿瘤的靶向治疗提供了理论依据。; 潘洪飞任大鹏孟凡东田昕李妍; 关键词：腺样囊性癌雷帕霉素 MTOR

人肝癌细胞中纯化的HSP70的免疫活性研究: 2011年; 目的用改良的方法提取纯化人肝癌细胞中的HSP70,通过观察其对DC瘤苗的体外活化,证实其免疫活性。方法利用两步超滤及离子交换层析提纯HSP70,体外致敏外周血单核细胞来源的DC,检测DC表面成熟标志的变化。再将此DC与T细胞共培养,用CCK-8试剂盒检测其对HSP70同源及非同源肿瘤的杀瘤活性。结果用这种改良的简便快捷的HSP70生化提纯方法可获得与其他常被采用方法相似得率的目的蛋白,用其体外致敏DC可使其高表达CD80、CD83、CD86及HLA-DR等成熟标志。用此DC与T细胞体外共培养后,具有较高的对HSP70同源肿瘤的特异性杀伤活性。结论用此改良的提纯方法,可获得具有免疫活性的HSP70,在体外具有很好的活化DC瘤苗的能力。; 孟凡东隋承光田昕李妍王晓华马萍姜又红刘云鹏; 关键词：热休克蛋白70 树突状细胞肿瘤疫苗人肝癌细胞

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辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(LS2010170)