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重庆市自然科学基金(2008BA5003)
作品数:
2
被引量:5
H指数:1
相关作者:
刘泽军
高兴
蔡云
陈杰
扬新
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相关机构:
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Puma荧光素酶报告基因的构建和鉴定
2011年
目的为研究p53家族调控细胞凋亡的机制,构建并鉴定插入人Puma基因的启动子片段的荧光素酶报告基因载体。方法采用PCR技术从人类HepG2细胞中扩增Puma启动子的含p53反应元件的180bpDNA片段,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。经测序确定所扩增的DNA序列;将其转染人人类肺腺癌141299细胞中,双报告基因实验检测荧光素酶活力。结果测序结果表明扩增的Puma启动子序列正确,活性检测显示构建的报告基因具有启动子活性。结论克隆了含p53反应元件的Puma启动子,成功构建了人类Puma启动子报告基因,为p53家族凋亡通路的功能研究提供了必要的实验材料。
杨新
邱实
顾寿智
蔡云
高兴
刘泽军
关键词:
PUMA
启动子
荧光素酶
报告基因
凋亡
人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定
被引量:5
2009年
目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制备了3个多克隆抗体。用ELISA检测抗体效价,Western blot比较3个抗体检测内源性抗原的效果,并用体外转录翻译系统制备的完整iASPP蛋白作为对照标准。结果:1号抗体效价>1∶32000,2号和3号抗体效价>1∶16000。Western blot确定100000为完整iASPP蛋白的条带位置。结论:成功地制备了iASPP的多克隆抗体,为深入研究完整iASPP提供了有用的工具。
蔡云
高兴
辛海明
陈杰
扬新
刘泽军
关键词:
多克隆抗体
免疫印迹
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