国家自然科学基金(30500231)
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
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- 小鼠IDO真核表达载体的构建及其在未成熟树突状细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建小鼠pEGFP-N1-IDO真核表达载体并观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法利用RT-PCR方法扩增小鼠IDO基因全长,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pEGFP-N1。经酶切和测序鉴定后,用DOTAP脂质体转染法转染未成熟树突状细胞。通过G418筛选,用倒置荧光显微镜观察转染的未成熟树突状细胞绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR、Westernblot检测IDO的表达。结果小鼠全长IDO基因序列正确插入pEGFP-N1载体,与GenBank中报道的序列一致,成功构建了pEGFP-N1-IDO真核表达载体,并转染未成熟树突状细胞,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和转染未成熟树突状细胞,并证明能有效表达于未成熟树突状细胞中。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：3-双加氧酶绿色荧光蛋白真核表达载体未成熟树突状细胞
- 脂质体介导的IDO基因转染未成熟树突状细胞对其成熟性及功能的影响
- 2010年
- 目的:探讨脂质体介导的IDO基因转染对未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,imDCs)的成熟性及功能的影响。方法:从BALB/c小鼠骨髓培养imDCs,形态学观察后用流式细胞术鉴定imDC后,将其分为IDO+-imDC组:重组pEGFP-N1-IDO质粒在脂质体介导下转染imDCs;IDO--imDC组:pEGFP-N1空质粒转染imDCs;imDCs组:imDCs不做特殊处理;mDC组:将培养的imDC用TNF-α诱导成熟。流式细胞术检测IDO基因转染imDC细胞后细胞表型是否发生变化。Western blot检测各组IDO蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测各组在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力。结果:BALB/c小鼠骨髓培养的细胞表面标志和细胞形态符合imDCs典型特征;Western blot结果显示IDO+-imDC组可见IDO蛋白表达;IDO+-imDC组细胞表面分子CD80、CD86、MHCⅡ表达率分别为(9.4±2.2)%、(8.7±1.1)%、(11.4±2.6)%,imDC组分别为(8.5±1.8)%、(7.5±1.6)%、(10.2±2.1)%,两组比较无显著差异(P均>0.05),IDO+-imDC组在体外刺激T淋巴细胞增殖的能力明显低于imDC组(678±90.3vs1199±275.5,P<0.01)。结论:脂质体介导的IDO基因转染imDCs能维持细胞于未成熟状态,在MLR中,对T细胞增殖有明显的抑制作用。
- 廖伟安晓静钱桂生赵聪敏
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶树突细胞脂质体转染
- 吲哚胺2,3-双加氧酶基因转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型CD4~＋ T细胞的影响
- 2008年
- 目的以pEGFP-N1-IDO真核表达载体转染未成熟树突细胞,观察吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因对CD4+ T细胞的影响。方法体外扩增小鼠骨髓来源的未成熟树突细胞,采用光镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术鉴定后,采用DOTAP脂质体转染法进行转染,倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。同时建立卵蛋白致敏小鼠模型,分离并纯化脾脏CD4+ T细胞,用3H-TdR掺入法进行混合淋巴细胞反应实验,观察IDO转染未成熟树突细胞对卵蛋白致敏小鼠模型脾脏CD4+ T细胞增殖的影响,并用TUNEL法检测CD4+T细胞凋亡情况。结果IDO基因转染未成熟树突细胞能抑制卵蛋白致敏小鼠模型CD4+ T细胞增殖,pEG-FP-N1-IDO质粒转染组CD4+ T细胞减少,与pEGFP-N1空质粒转染组和对照组比较差异显著(P<0.05);IDO基因转染未成熟树突细胞可诱导CD4+ T细胞凋亡,pEGFP-N1-IDO质粒转染组CD4+ T细胞凋亡率为15.3%±2.6%,明显高于对照组和pEGFP-N1空质粒转染组和对照组(P<0.01)。结论IDO基因表达的上调可能是诱导哮喘免疫耐受的机制之一。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶
- 儿童过敏性哮喘患者中Th17/Treg比值与IDO相关性的研究被引量：7
- 2018年
- 目的证实儿童过敏性哮喘患者中吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)可能通过影响Th17/Treg分化及其相关细胞因子参与儿童过敏性哮喘的发病。方法选取该科室门诊5岁以上初次诊断为过敏性哮喘的患儿共33例,33例健康儿童作为对照组;进行肺功能、皮肤点刺试验、嗜酸性粒细胞计数;留取静脉血检测Th17细胞及Treg数目,检测白细胞介素(IL)-10、IL-17、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)水平;静脉血和诱导痰液检测IDO代谢产物色氨酸及犬尿氨酸浓度。结果与对照组比较,哮喘组存在显著的Th17/Treg失衡;IL-17、IL-6水平显著升高,TGF-β、IL-10水平显著降低;IDO水平明显降低,其水平与Th17/Treg比例呈显著负相关关系。结论 IDO可能是Th17细胞向Treg转换的分子"开关",在哮喘发病中起潜在的保护作用。
- 胡影陈志强金玲王梅廖伟
- 关键词：TH17/TREGIL-10IL-6哮喘
- 小鼠IDO真核表达载体的构建及其在未成熟树突状细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建小鼠pEGFP-N1-IDO基因真核表达载体并观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法利用RT-PCR方法扩增小鼠IDO基因全长,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,用DOTAP脂质体转染法转染未成熟树突状细胞,通过G418筛选,转染的未成熟树突状细胞,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR、Western-blot检测IDO的表达。结果小鼠全长IDO基因序列正确插入pEGFP-N1载体,与GenBank中报道的序列一致,成功构建了pEGFP-N1-IDO真核表达载体,并转染未成熟树突状细胞,成功地表达目的基因。结论真核表达载体成功构建和转染未成熟树突状细胞,并证明能有效表达于未成熟树突状细胞中。
- 安晓静钱桂生王长征夏俊波党涛廖伟
- 关键词：绿色荧光蛋白真核表达载体未成熟树突状细胞
