国家自然科学基金(30500235)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
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- 抑制细胞外信号调节激酶转导结直肠癌细胞组蛋白磷酸化和基因表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的观察人结直肠癌细胞中细胞外信号调节激酶一丝裂原激活蛋白激酶（ERK-MAPK）信号转导途径与组蛋白磷酸化水平及其相关蛋白表达的关系，及其对细胞增殖和细胞周期的影响。方法培养结直肠癌细胞系SW1116、HCT116，以终浓度分别为0、10、20及40μmol／L的ERK—MAPK阻断剂U0126干预细胞。细胞计数试剂盒（cell countingkit，CCK-8）检测细胞活力影响，以流式细胞术（flowcytometry，FCM）研究细胞周期变化，Western免疫印迹法分析组蛋白H3激酶核糖体S6丝氨酸-苏氨酸激酶2（ribosomal S6 kinase2，RSK-2）、丝裂原和应激-激活的激酶1和2（mitogen-andstress-activatedkinase1and2，MSKl和MSK2）、组蛋白H3（Ser10）磷酸化水平及c—Fos蛋白表达变化情况。结果CCK-8法检测发现ERK—MAPK阻断剂能以剂量和时间依赖方式明显抑制2种结直肠癌细胞的增殖，增殖率可下降至对照组的47％；并能明显增加G0／G1期细胞百分比（P〈O．01），而S期细胞百分比明显减少（P〈0．01）。Western印迹结果显示U0126干预后，H3激酶MSKl和RSK2表达明显降低，分别为对照HCT116的28％和40％，而MSK2蛋白水平在2个细胞系中均无明显变化。相应地，组蛋白H3磷酸化（Ser10）水平亦降低，相关蛋白c-Fos的表达亦明显下降。结论抑制ERK—MAPK信号转导可能通过抑制组蛋白H3激酶MSK1、RSK2活性而降低组蛋白H3磷酸化水平，进而减少c-Fos蛋白表达，从而抑制人结直肠癌细胞的增殖和生长。
- 李文英叶婷朱红音陈萦晅房静远
- 关键词：细胞系细胞外信号调节激酶细胞周期
- 丝裂原活化蛋白激酶特异性小干扰RNA表达载体对结肠癌细胞周期和DNA甲基化的影响被引量：1
- 2007年
- 目的构建丝裂原活化蛋白激酶(MEK)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其静默效应及对结肠癌细胞SW1116生长周期和DNA甲基化的影响。方法选择MEK不同靶点寡核苷酸片段.克隆到pGCsilencer真核表达载体中。脂质体转染SW1116细胞,荧光显微镜评估转染效率,G418筛选稳定表达siRNA的细胞。Western印迹法检测siRNA对MEK蛋白表达的静默效果。应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞生长活力,流式细胞术分析细胞周期,甲基化特异性PCR和DNA测序检测p16^(INK4A)基因启动子甲基化状态。结果构建2个靶点的MEK重组质粒,分别转染和联合转染SW1116细胞,转染效率约为72.1%,G418筛选培养2周得到稳定表达MEK siRNA的细胞,MEK蛋白抑制率分别为74.2%和69.1%和90.2%.下游分子ERK蛋白磷酸化水平随之降低;细胞增殖活力下降2～4倍和细胞周期阻滞于G1期,细胞周期负调控因子p16^(INK4A)启动子区呈低甲基化状态。结论MEK特异性siRNA表达载体对结肠癌细胞MEK蛋白表达有一定的静默效果,多靶点联合效果更好.阻滞细胞周期于G1期,促进p16^(INK4A)基因去甲基化。
- 王霞陈萦晅房静远陆嵘孙丹凤朱红音李恩灵沈冠凤
- 关键词：结肠肿瘤DNA甲基化小分子干扰丝裂原激活蛋白激酶类
