国家自然科学基金(81172632)
- 作品数：9 被引量：44H指数：4
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- 4-氨基-1,8-萘二胺对三氧化二砷在肝癌细胞中的增敏作用研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1（PARP-1）抑制剂4-氨基-1,8-萘二胺（4-AN）对三氧化二砷（ATO）治疗肝癌的敏感性影响及其相关机制。方法培养人肝癌细胞HepG2,分为单独ATO用药组和联合用药组（4-AN＋ATO）,采用MTT实验、群体倍增实验和克隆形成实验比较两组细胞存活、增殖情况;应用ELISA、单细胞凝胶电泳（彗星实验）及微核实验分别检测细胞内8-羟基鸟嘌呤（8-OH-dG）含量,DNA链断裂、修复以及染色体损伤情况。结果当ATO浓度为2~10μmol/L时,联合用药组细胞存活率和集落形成率低于ATO组（P〈0.05）,ATO 2~50μmol/L时,联合用药组细胞群体倍增时间高于ATO组（P〈0.05）;在ATO 2~20μmol/L浓度范围内,彗星细胞尾长（L-Tail）、尾距（OTM）和8-OH-dG含量较ATO组高,差异均有统计学意义（P均〈0.05）;彗星实验检测损伤修复结果显示,联合用药组细胞的DNA损伤修复效率低于ATO组（P〈0.05）;微核实验结果显示当ATO浓度为5~20μmol/L时,联合用药组微核细胞率高于ATO组（P〈0.05）。结论 PARP-1抑制剂4-AN能显著增强ATO杀伤肝癌细胞的敏感性,其机制与抑制肝癌细胞DNA损伤修复有关。
- 李洋罗擎英邓建军张遵真
- 关键词：三氧化二砷
- 外源性还原型谷胱甘肽对亚砷酸钠诱导遗传毒性及氧化应激的保护作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨外源性还原型谷胱甘肽（GSH）能否拮抗亚砷酸钠（NaAsO2）诱导的遗传毒性及氧化损伤。方法以人肺腺癌A549细胞为研究对象，按处理方式分为对照组、单独NaAsO2或GSH处理组及不同浓度GSH和NaAsO2联合组，观察GSH处理对细胞存活、氧化应激水平、DNA单链断裂及染色体损伤的影响。结果NaAsO2单独染毒处理可导致细胞存活率、集落形成率、SOD酶活性和GSH含量低于对照组，而ROS水平、彗星率、Oliver尾距和微核细胞率较对照组增加（P〈0．05）。GsH浓度为0．5—5mmol／L时，联合处理组与单独NaAsO2处理组比较上述各项检测指标差异无显著性；而当GSH剂量为10和20mmol／L时，NaAsO2处理产生的毒性作用虽有所改善，却仍显著低于对照组（P〈0．05）；随着GSH剂量水平的增加，在GSH为40或50mmol／L时，细胞存活、集落形成、氧化应激水平及DNA和染色体损伤情况与对照组比较差异已无显著性。结论外源性添加高浓度的GSH能够显著减弱NaAsO2的细胞毒性，减轻DNA、染色体损伤及氧化应激水平。
- 陈承志蒋学君张遵真
- 关键词：亚砷酸钠谷胱甘肽DNA损伤染色体断裂氧化应激
- DNA聚合酶β表达水平对苯代谢物氢醌致细胞凋亡及线粒体膜电位的影响
- 2011年
- 目的探讨DNA聚合酶β（DNA polymemsebeta，polβ）对氢醌（HQ）所致细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法以polβ野生型（polβ＋/＋）、polβ缺陷型（polβ-／-）及polβ高表达型（polpoe）小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象，以不同浓度的HQ溶液染毒后，采用流式细胞术分别检测HQ对细胞凋亡和线粒体膜电位（△ψm）的影响，试剂盒法测定细胞内活性氧（ROS）和羟自由基（·OH）含量；化学发光法分析细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活力。结果与对照组相比，各染毒组凋亡细胞率和△ψm降低的细胞比例明显增加，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与polβ＋/＋细胞比较，20．00、40．00、80．00μmol／L染毒组polβ-／-细胞凋亡率明显增高，10．00、20．00、40．00、80．00μmol/L染毒组polβ oe细胞凋亡率明显降低，差异均有统计学意义（P（0．05）。与polβ＋／＋细胞（20．60％±0．57％、37．95％±0．64％、44．50％±1．27％、57．55％±1．06％）比较，10．00、20．00、40．00、80．00μmol／L染毒组polβ-／-细胞△ψm降低的细胞比例（33．60％±1．55％、46．05％±1．77％、52．75％±2．05％、75．20％±0．56％）明显增高，polβ oe细胞△ψm降低的细胞比例（16．05％±1．20％、29．80％±1．21％、35．15％±1．06％、53．80％±0．85％）明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与polβ＋/＋细胞比较，各染毒组polβ-/-细胞产生的荧光强度明显增高，polβ oe细胞的荧光强度明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与pol β ＋/＋细胞相比，20．00、40．00μmol／L染毒组pol β-／-细胞内·0H含量明显增高，polβ oe细胞内·0H含量明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。在相同浓度HQ染毒剂量下，polβ-／-细胞内SOD和GSH-Px消耗最快，polβ oe细胞内的SOD和GSH-Px消耗�
- 陈晨杨沫张遵真吴媚邓雯文
- 关键词：DNA聚合酶Β膜电位过氧化物酶类
- 抗生素杂质头孢呋辛内酯的遗传毒性研究
- 2012年
- 目的研究抗生素杂质头孢呋辛内酯的遗传毒性。方法采用一套筛选和检测遗传毒性的方法分别从基因突变、染色体畸变、DNA损伤与修复3个不同遗传学终点研究头孢呋辛内酯的遗传毒性。结果 (1)细菌回复突变试验:在加与不加大鼠肝微粒体酶(S9)的条件下,头孢呋辛内酯在不同测试浓度下各菌株回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍。(2)昆明种小鼠骨髓细胞微核试验:阳性对照组的微核率(19.74‰)显著高于阴性对照组(1.82‰)(P<0.05),而头孢呋辛内酯在125、250和500mg/kg剂量组所诱发的微核率分别为3.06‰、2.83‰和3.24‰,与阴性对照组(1.82‰)相比差异无显著性(P>0.05)。(3)中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验:在加S9与不加S9两种测试条件下,并于24h和48h后收集细胞进行染色体畸变分析,发现阳性对照组所诱发的染色体畸变发生率明显高于阴性对照组(P<0.05),而受试物各剂量组的染色体畸变率与阴性对照组相比差异无显著性(P>0.05)。(4)小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验:各剂量组的相对存活率(RS)、相对生存率(RV)、相对悬浮生长(RSG)和相对总生长(RTG)均随着头孢呋辛内酯剂量的升高而下降,但各剂量组的TK基因位点总突变频率(TMF)与阴性对照组相比差异无显著性(P>0.05)。(5)小鼠淋巴瘤细胞彗星试验:阳性对照组的彗星率为94.5%,明显高于阴性对照组(7.0%)(P<0.05),而受试物各剂量组的彗星率与阴性对照组相比,差异无显著性(P>0.05)。结论该实验条件下,头孢呋辛内酯未见遗传毒性,表明其不具有致突变作用。
- 崔杰张遵真冉云赵巍康晓熙邓雯文
- 关键词：遗传毒性
- 亚砷酸钠和三氧化二砷对人正常肝细胞增殖与凋亡效应的影响被引量：8
- 2014年
- 目的研究亚砷酸钠和三氧化二砷对人正常肝细胞L02增殖与凋亡效应的影响。方法分别采用亚砷酸钠和三氧化二砷处理人正常肝细胞L02,比色实验和集落形成实验检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,试剂盒法测定细胞内活性氧水平和谷胱甘肽含量,微核实验评价细胞染色体损伤。结果随着亚砷酸钠或三氧化二砷染毒浓度的增加,L02细胞的存活率、集落形成率和谷胱甘肽含量均下降,而集落形成抑制率、凋亡率、活性氧水平和微核率均增加,此外细胞周期都被阻滞在G2/M期。结论亚砷酸钠和三氧化二砷均能诱导人正常肝细胞L02活性氧增加和谷胱甘肽含量下降,继而引起细胞染色体损伤、细胞凋亡、细胞周期阻滞和细胞生长抑制,提示氧化应激是亚砷酸钠和三氧化二砷"致癌"与"治癌"共同的分子机制。
- 胡亚男赵巍陈承志蒋学君张遵真
- 关键词：亚砷酸钠三氧化二砷凋亡氧化应激染色体损伤
- 凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达
- 2013年
- 目的利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因。并用TA克隆法,将AIF目的基因连接到pUC-T载体,行双酶切和DNA测序鉴定;回收目的片段并将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒AIF-pcDNA3.1(+)。最后,将AIF-pcDNA3.1(+)转染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测转染细胞AIF基因的表达。结果成功扩增617bp的AIF目的基因片段并连接pUC-T载体,测序后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,DNA序列分析显示,连接在真核表达载体上的基因片段与GenBank中的AIF序列完全吻合。RT-PCR和Western blot检测结果显示,转染了AIF-pcDNA3.1(+)的A549细胞AIF mRNA和蛋白表达水平均高于未转染细胞(P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),转染后能够在A549细胞中表达。
- 邓雯文刘蜀坤张遵真
- 关键词：凋亡诱导因子
- 油菜秸杆外壳对水溶液中六价铬的吸附作用被引量：22
- 2015年
- 为探讨油菜秸秆外壳去除水溶液中重金属铬的可能性及其影响因素,并研究其吸附性能和吸附机制.采用Box-Behnken Design实验设计研究了水溶液中六价铬[Cr(Ⅵ)]初始浓度、p H值范围、油菜秸秆外壳添加量和吸附温度4个因素对油菜秸秆外壳去除溶液中Cr(Ⅵ)的影响作用;用吸附等温方程、吸附动力学方程与热力学方程分别探讨了油菜秸秆外壳去除水溶液中Cr(Ⅵ)的行为;采用红外光谱技术对油菜秸秆外壳吸附水溶液Cr(Ⅵ)前后进行表征,探讨其吸附机制.油菜秸秆外壳去除溶液中Cr(Ⅵ)的最佳条件组合为:在吸附时间为1440min时,Cr(Ⅵ)初始浓度为99.15mg/L、p H值为1.01、油菜秸秆外壳添加量为2.90g/L和吸附温度35.70℃,Cr(Ⅵ)去除率为91.97%;吸附等温线拟合,吸附Cr(Ⅵ)行为符合Freundlich方程,为优惠吸附;热力学研究表明:溶液中Cr(Ⅵ)吸附属吸热反应,且为自发吸附行为;吸附动力学显示:油菜秸秆外壳去除溶液Cr(Ⅵ)符合准二阶动力学方程,吸附过程中存在离子交换;红外光谱提示:吸附过程中,O—H、C—H、NH3+、N—H和C—O基团与Cr(Ⅵ)络合吸附发挥了重要作用.油菜秸秆外壳能够有效吸附水溶液中的Cr(Ⅵ),p H值是最为重要的影响因素.
- 刘新冷言冰谷仕艳张遵真
- 关键词：铬油菜秸秆DESIGN生物吸附
- 三氧化二砷诱导肿瘤细胞死亡的分子机制研究进展被引量：6
- 2014年
- 三氧化二砷(As2O3)在血液系统肿瘤和多种实体肿瘤的治疗中已取得了一定的成就,然而其抗癌机制尚未得到系统阐明。凋亡是公认的砷剂诱导肿瘤细胞死亡的基本方式,此外自噬性细胞死亡(autophagy)、程序性坏死(necrosis)以及永久性衰老(permanent aging)等刚被人们认识的非凋亡性死亡最近也被报道在砷剂杀灭肿瘤细胞的作用中扮演重要角色。多种细胞死亡模式的发现对砷剂抗癌机制的深入研究和临床应用具有极其重要的意义。本文结合最新研究成果,对As2O3诱导肿瘤细胞多种死亡模式(凋亡、自噬性死亡、程序性坏死及永久性衰老)的分子机制进行了综述,并分析了在砷剂治癌过程中如何利用不同死亡模式的协同作用最大程度地提高其临床应用价值,以期为未来As2O3抗癌和增敏机制的深入研究提出新的研究方向。
- 罗擎英李洋张遵真
- 关键词：三氧化二砷自噬性细胞死亡程序性坏死
