国家自然科学基金(81172651)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 相关作者：吴坤侯丽颖张旭光余洋黄晓莉更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学哈尔滨商业大学国家教育部更多>>
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- 酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨酸性神经磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法:常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明(desipramine,DES)处理组(12.5μmol/L DES作用2 h),对照组(含2%胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组(用12.5μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20μg/mL VES)以及VES处理组(20μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果:VES(20μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制(P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组(P均<0.05);细胞形态学显示20μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%)(P均<0.05),VES+DES组(19.47%±4.46%)较VES组明显降低(P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低(P均<0.05)。结论:ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。
- 董瑞华赵巍王立明张旭光吴坤
- 关键词：维生素E琥珀酸酯内质网应激凋亡
- 维生素E琥珀酸酯通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞SGC-7901发生保护性自噬被引量：3
- 2013年
- 目的:观察维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)处理SGC-7901细胞后是否发生自噬,并探讨自噬在VES抑制细胞增殖中的作用。方法:用不同浓度(0、5、10、15、20μg/mL)VES处理SGC-7901细胞24 h后,电子显微镜观察自噬体形态;VES处理转染GFP-LC3质粒后的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3,以及Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR活性变化;采用自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)和3-甲基腺苷(3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力。结果:电子显微镜观察显示经不同浓度VES处理后,细胞中出现了典型的自噬囊泡以及自噬溶酶体等自噬各阶段的形态变化;荧光显微镜观察显示GFP-LC3质粒转染后随VES处理剂量的增加,绿色点状荧光逐渐聚集增强;Western blot结果显示,VES可使LC3-Ⅱ蛋白表达增强;并下调Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR的活性;MTT结果显示VES+CQ组和VES+3-MA组的细胞增殖抑制率均明显高于VES单独处理组(P均<0.05),即自噬抑制剂CQ与3-MA预处理使细胞增殖率进一步下降,提示VES诱导的肿瘤细胞自噬对肿瘤细胞增殖具有保护作用。结论:VES可以通过抑制Akt/mTOR通路活性诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生自噬,且此种自噬为保护性自噬。
- 侯丽颖孙燕佩张旭光赵栋吴坤
- 关键词：维生素E琥珀酸酯胃癌细胞SGC-7901自噬
- 维生素E琥珀酸酯通过内质网应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究被引量：5
- 2012年
- 目的:探讨内质网应激在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用。方法:分别采用Western blotting和RT-PCR检测VES不同剂量(0、5、10和20μg/ml)处理SGC-7901细胞24 h和20μg/ml VES处理SGC-7901细胞不同时间对内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)GRP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的蛋白和mRNA表达的影响;进一步采用RNA瞬时干扰阻断CHOP的表达后用20μg/ml VES作用SGC-7901细胞24 h,采用DAPI染色法观察细胞凋亡的改变。结果:20μg/ml VES组在mRNA水平卜均诱导GRP78、GRP94和CHOP的表达增加;在蛋白水平上20μg/ml VES显著增加GRP78和CHOP的表达,GRP94表达先降低,而后又升高;阻断CHOP后VES诱导的细胞凋亡由46.3%降低为27.9%(P<0.05)。结论:内质网应激可能参与了VES诱导的SGC-7901细胞凋亡。
- 黄晓莉赵艳张志宏张旭光王晓琳贾莉吴坤
- 关键词：内质网应激维生素E琥珀酸酯细胞凋亡
- AMPK在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞自噬中的作用研究被引量：2
- 2016年
- 目的:研究维生素E琥珀酸酯(VES)是否影响人胃癌SGC-7901细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性,并探讨AMPK在VES诱导自噬中的作用。方法:用不同剂量(5、10、15、20μg/m L)VES处理SGC-7901细胞24 h,以及20μg/m L VES分别处理SGC-7901细胞3、6、12、24 h后,Western blot法检测SGC-7901细胞中自噬标志蛋白LC3、Beclin-1及AMPK、ACC及其磷酸化蛋白的表达。用RNAi技术沉默AMPK,20μg/m LVES处理SGC-7901细胞24 h,Western blot法检测LC3、Beclin-1蛋白以及AMPK、m TOR、p70S6K与4EBP-1及其磷酸化蛋白表达,并采用荧光定量PCR法检测LC3 m RNA表达情况。结果:VES处理SGC-7901细胞后,与对照组比较,随着VES剂量的增加、作用时间的增长,AMPK磷酸化水平上升,LC3、Beclin-1蛋白表达增加(P<0.05)。RNAi沉默AMPK后,与单纯VES处理组比较,LC3、Beclin-1蛋白表达降低,LC3 m RNA表达下降(P<0.05);m TOR、p70S6K及4EBP-1磷酸化活性升高(P<0.05)。结论:VES可诱导SGC-7901细胞中AMPK活化,AMPK活化后影响m TOR及其下游分子活性,继而诱导自噬的发生。
- 余洋侯丽颖宋华翠吴坤
- 关键词：维生素E琥珀酸酯腺苷酸活化蛋白激酶自噬胃癌细胞
- 维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用。方法:用不同剂量(0、5、10、15、20μg/m L)VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3(LC3)荧光强度和分布情况,Western blot分别检测内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和LC3、Beclin-1的表达情况;在分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和氯喹(CQ)以及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理2 h后,以20μg/m L VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,Western blot分别检测内质网应激标志物GRP78、GRP94及自噬标志蛋白LC3、Beclin-1的变化。结果:与阴性对照组比较,随着VES剂量的增加,激光共聚焦显微镜观察到LC3在细胞内点状分布逐渐聚集和增强,GRP78和GRP94表达先降低后升高(P均<0.05),LC3和Beclin-1表达逐渐升高(P均<0.05);VES+3-MA组及VES+CQ组的GRP78和GRP94蛋白表达均高于单独VES组(P均<0.05);VES+4-PBA组的LC3和Beclin-1蛋白表达均低于单独VES组(P均<0.05)。结论:VES处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激可以相互调节,具有交互作用。
- 宋华翠侯丽颖綦峥吴坤
- 关键词：维生素E琥珀酸酯内质网应激自噬胃癌细胞
- 维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与活性氧蓄积的交互作用被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与活性氧(ROS)蓄积是否存在交互作用。方法:不同剂量(0、5、10、15、20μg/m L)VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,采用免疫荧光染色观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3(LC3)的荧光强度和分布情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,流式细胞术检测细胞内ROS水平;用ROS淬灭剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理2 h后以20μg/m L VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,免疫荧光染色观察细胞内LC3荧光强度和分布情况,Western blot检测LC3和Beclin-1的表达情况;RNA瞬时干扰阻断BECN-1基因的表达后,以20μg/m L VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,流式细胞术检测细胞内ROS水平。结果:与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,LC3的荧光强度逐渐增强;LC3和Beclin-1蛋白表达均逐渐升高;流式细胞术检测结果显示胞内ROS水平逐渐增强;淬灭ROS之后LC3荧光强度以及LC3和Beclin-1蛋白表达水平均明显低于VES单独处理组(P<0.05);阻断自噬关键基因BECN-1后细胞内ROS水平高于VES单独处理组(P<0.05)。结论:VES可诱导人胃癌细胞发生自噬及ROS蓄积,并且VES处理人胃癌细胞过程中自噬与ROS水平可以相互调节,具有交互作用。
- 徐培翔侯丽颖宋华翠余洋吴坤
- 关键词：维生素E琥珀酸酯胃癌细胞自噬活性氧
