“十一五”国家科技支撑计划(2007BAD86B04-4)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：陈坚刘业兵姜晓晨张晓杰张志刚更多>>
- 相关机构：中国兽医药品监察所北京信得威特科技有限公司更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 双重RT-PCR方法检测猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒被引量：4
- 2010年
- 为建立特异、敏感的猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的双重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank登录的SIVM基因保守序列和PRRSV美洲型毒株的N基因保守序列,设计合成了2对特异引物,通过对扩增条件的优化,建立检测SIV和PRRSV的双重RT-PCR方法。检测结果显示:该方法可同时扩增出SIV(345bp)和PRRSV(520bp)的特异性片段;而猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型及阴性鸡胚尿囊液核酸扩增结果均为阴性;对SIV和PRRSV2种病毒混合液的最小检出量分别为102EID50/0.1mL和103TCID50/0.1mL。应用双重RT-PCR和病毒分离法对12份临床疑似样品进行对比检测,结果表明:除双重RT-PCR检测到双阳性的3份混合感染病料中1份未分离到PRRSV外,其余2份均分离出病毒。证明该方法具有良好的特异性、敏感性,可以用于临床样品的早期快速检测。
- 罗俊刘业兵陈坚宁宜宝
- 关键词：猪流感病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒双重RT-PCR
- SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法检测猪细小病毒被引量：6
- 2011年
- 为建立特异敏感的猪细小病毒(PPV)的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,本研究根据GenBank上PPV NS1保守序列设计合成了1对引物,利用本实验室构建的重组质粒(pMD18-T-PPV NS1)为标准模板,对反应条件进行优化,绘制标准曲线,并进行熔解曲线分析,建立了PPV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。分别进行了特异性、敏感性及重复性检验,结果表明,本方法具有良好的特异性,与PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2、SIV及阴性对照均为阴性;其最低检出量为7copies/μL,比PCR敏感100倍,且批内和批间重复性良好。用该方法对15份临床病料进行检测,并与常规PCR、环介导等温扩增(LAMP)方法进行对比,显示该方法灵敏度高、成本低,能够对样品组织中病毒进行定量检测,为快速检测PPV提供了有效的技术手段。
- 陈坚刘业兵张志刚姜晓晨张晓杰
- 关键词：猪细小病毒SYBR
