国家自然科学基金(30900026)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
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- 水平基因转移促进MRSA的耐药和定植与感染被引量：3
- 2012年
- 金黄色葡萄球菌是人类重要病原体之一，引起的疾病从轻度皮肤感染到危及生命的各类严重侵袭性感染，如致死性肺炎、心内膜炎和败血症等。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin—resistant Staphylococcusaureus，MRSA）在世界范围内的流行与临床使用β内酰胺类抗生素治疗后所造成的选择性压力有关。
- 李敏
- 关键词：侵袭性感染MRSAΒ内酰胺类抗生素定植耐药
- 调节高致病力CA—MRSA α-毒素表达的基因筛选及功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的 从CA-MILSA全基因组水平筛选出除域值感知（quorum sensing）基因系统以外对α-毒素表达有明显调节作用的基因,并研究其调节机制.方法 使用本实验室构建并已申请国家专利的真核转座酶为基础的转座系统构建CA-MKSA转座子,并随机插入突变文库.通过用5%羊血平板筛选出与野生株相比溶血明显改变的克隆,接着用定量RT-PCR以及WB等实验筛选出α-毒素表达明显下降的突变菌株,运用随机引物反向PCB和测序等方法鉴定出突变基因.通过基因互补表达实验、小鼠菌血症与皮肤脓肿模型实验以及荧光定量RT-PCR等方法对目标基因以及其编码蛋白的功能进行研究.结果 在CA-MRSA中建立了一个库容量约为104个克隆的转座子随机插入突变库,最终筛选出25株α-毒素表达明显下降的突变菌株.CA-MRSA野生株溶血直径平均为212 mm,而其中AraC转录调节子突变株（AraC-）几乎无溶血,当将AraC基因互补回突变株（AraC-pT181araC）后,其溶血直径平均为197 mm,部分恢复到野生株溶血水平.荧光定量RT-PCR结果显示,与CA-MRSA野生株（PSMα为257.30±37.33,agr为115.60±0.81,α-毒素为3.23±0.21）相比,在AraC-中α-毒素、PSMα以及agr表达均明显下调（α-毒素1.09±0.01：t=10.18,P〈0.01;PSMα 34.85±2.15：t=5.95,P〈0.05;agr 35.19±1.72：t=42.33,P〈0.01）.小鼠菌血症模型实验结果为CA-MRSA野生株与AraC-（（x）±5）差异具有统计学意义（χ2=21.34,P〈0.01）.AraC-p1F181araC中PSMα、agr、α-毒素（hla）表达（分别为PSMα：180.10±15.29,agr：101.50±8.96,α-毒素：2.59±0.26）均部分恢复到野生株表达水平,与CA-MRSA野生株相比,差异无统计学意义（PSMα：t=1.914,P〉0.05;agr：t=1.563,P〉0.05;α-毒素：t=1.923,P〉0.05）.CIpP在MaC-（0.21±0.01）和AraC-pT181araC（0.17±0.03）中的表达与CA-MRSA野生株（0.20±0.01）相比,差异无统计学意义（t=0.555,P〉0.05和t=0.851,P〉0.05）.小鼠皮肤脓肿�
- 李敏胡锦辉李茹张心菊阮斐诒吕元
- 关键词：甲氧西林抗药性细菌毒素类
- 新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄葡萄球菌生物膜形成和毒力的影响被引量：6
- 2011年
- 目的 研究新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄葡萄球菌生物膜形成及毒力的影响.方法 采用基因敲除及基因互补技术获得耐甲氧西林金黄葡萄球菌（MRSA） ST-239 HS770 sasX基因突变株及基因互补株,应用半定量生物膜形成试验检测sasX基因突变前后对金黄葡萄球菌生物膜形成的影响,使用小鼠皮肤脓肿形成模型研究SasX对金黄葡萄球菌毒力的影响.结果 采用pKOR1质粒构建重组质粒并成功获得sasX基因敲除株.与野生株相比,突变株HS770△sasX生物膜形成能力明显减弱（P＜0.05）,互补表达株HS770△sasX（pRBsasX）生物膜形成能力无明显统计学差异（P＞0.05）.与野生株相比,突变株HS770△sasX初始黏附能力明显减弱（P＜0.05）,互补表达株HS770△sasX（pRBsasX）初始黏附能力无明显统计学差异（P＞0.05）.HS770和HS770△sasX接种小鼠后均形成明显的脓肿,PBS对照组小鼠皮肤表面未见脓肿产生.细菌接种后第2天小鼠皮肤脓肿面积达到最大,随着接种时间的延长小鼠皮肤脓肿面积逐渐缩小.但是从接种后第1天开始,HS770接种组小鼠皮肤脓肿形成面积在同一时间点上明显大于HS770△sasX接种组（P＜0.05）.结论 采用pKOR1质粒进行基因敲除可以明显提高目的基因的敲除效率.SasX可以通过影响细菌的初始黏附从而影响生物膜的形成,SasX是金黄葡萄球菌在医院环境内持续感染重要的毒力因子.
- 杜昕宋燕胡锦辉阮斐怡吕元李敏
- 关键词：金黄葡萄球菌生物膜毒力因子
- 新的细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布被引量：11
- 2011年
- 目的 研究细胞壁锚定蛋白编码基因sasX在金黄色葡萄球菌中的分布及对细菌耐药性的影响.方法 随机收集上海华山医院2004、2007和2010年从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌共300株,收集同时期社区健康人群的鼻咽拭子分离鼻腔内定植的金黄色葡萄球菌170株.按照国际通用的MLST以及葡萄球菌A蛋白序列分析（spa typing）方法进行克隆株的鉴定分析.通过苯唑西林MIC值测定方法对MRSA进行检测.采用PCR结合测序方法对金黄色葡萄球菌携带sasX基因情况进行分析,采用纸片琼脂扩散法药敏试验分析临床sasX阳性和sasX阴性金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐药性.结果 300株从金黄色葡萄球菌感染的住院患者标本中分离到的致病性金黄色葡萄球菌克隆分型以ST239（110株,36.7％）和ST5（122株,40.7％）为主.2004至2010年,sasX基因在致病性的金黄色葡萄球菌中的阳性率从17％上升至39％,sasX基因在健康人鼻腔内分离的金黄色葡萄球菌中阳性率平均为0.59％.ST239中sasX的阳性率从47.2％上升至83.8％.携带sasX基因的MRSA百分率从26.4％上升至50.8％,携带sasX基因的MSSA的比率只约占10％.sasX基因阳性组对部分目前临床常用的抗菌药物的耐药性高于sasX基因阴性组.结论 sasX基因主要存在于医院环境内致病性的金黄色葡萄球菌中,SasX可能是金黄色葡萄球菌在医院环境内持续感染毒力因子之一,sasX基因的存在与细菌的耐药有关.
- 杜昕宋燕田月如阮斐怡吕元李敏
- 关键词：细菌蛋白质类
- 新的细胞壁锚定蛋白SasX促进金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力被引量：4
- 2012年
- 目的研究新的细胞壁锚定蛋白SasX对金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力的影响。方法采用基因敲除及基因互补技术获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）ST-239HS770sasX基因突变株及基因互补株。显微镜下直接观察sasX基因突变前后细菌自身的黏附聚集能力。通过黏附实验检测sasX基因突变前后对金黄色葡萄球菌黏附至人体鼻腔上皮细胞能力，并通过阻断实验检测表达纯化的SasX蛋白对金黄色葡萄球菌黏附至人体鼻腔上皮细胞的阻断能力，分析SasX蛋白对金黄色葡萄球菌定植能力的影响。结果与野生株相比，突变株HS770asasX自身的聚集能力明显减弱，而互补表达株HS770asasX（pRBsasX）的自身聚集能力与野生株无明显差异。与野生株相比，突变株HS770AsasX黏附至人体鼻腔上皮细胞能力明显减弱（P〈0．01），互补表达株HS770 asasX（pRBsasX）黏附能力明显增强（P〈0．01）。表达纯化的GST融合蛋白SasX和人体鼻腔上皮细胞预培养对于野生株HS770黏附至人体鼻腔上皮细胞的能力具有明显的抑制作用。结论新的细胞壁锚定蛋白SasX影响金黄色葡萄球菌黏附聚集和定植能力，金黄色葡萄球菌通过获得sasX基因更加容易定植到宿主易感部位，进而引发感染。
- 陈健杜昕宋燕阮斐怡吕元李敏
- 关键词：金黄色葡萄球菌定植
- 六年间血流感染的金黄色葡萄球菌的分子特征分析被引量：8
- 2011年
- 目的分析上海三级甲等医院2004--2010年血流感染的金黄色葡萄球菌克隆分型特点以及随时间的变化趋势，检测不同克隆株耐药和毒力基因携带情况。方法收集上海华山医院2004--2010年从不同患者血液样本中分离鉴定的金黄色葡萄球菌103株，通过苯唑西林MIC测定和SCCmec基因分型等方法对MRSA进行检测；按照国际通用的多位点保守基因测序（MLST）以及葡萄球菌A蛋白序列分析（spatyping）方法进行克隆株的鉴定分析，采用PCR方法对103株细菌的耐药以及毒力基因携带情况进行分析。结果103株金黄色葡萄球菌共检出MRSA66株（64．1％），其中SCCmecⅡ型35株，SCCmecDI型29株，SCCmecIV型2株，MSSA37株（35．9％）。66株MRSA的克隆分型以ST5（33株）和ST239（29株）为主，另外还包括2株ST59，1株ST641，1株ST6；其他克隆型均为MSSA。从2009年开始ST5和ST239克隆株在血流感染中的分离率明显下降（ST5从52．9％降至15．4％；ST239从61．1％降至15．4％），而其他类型以及新出现的MSSA克隆株分离率明显增加（如2009年S17分离率为41．7％；2010年新出现ST188及ST15等）。2010年血流感染的MSSA为84．6％。103株金黄色葡萄球菌mupA耐药基因阳性19株（18．4％），qacA／B耐药基因阳性41株（39．8％），70．6％的ST239杀菌剂耐药基因qacA／B阳性。在这103株血流感染的金黄色葡萄球菌中发现5株动物来源的克隆株，分别为4株ST398以及1株ST9。22个毒力基因除了sasX、lukSF以及arcA外，同一克隆株无论MRSA还是MSSA其毒力基因携带情况无明显差异，但是不同克隆株携带毒力基因有明显的差异。结论以ST5和ST239为主的MRSA在血流感染中的分离率明显下降，新的MSSA克隆株分离率明显增加，不同的克隆株耐药以及毒力基因的携带情况存在明显差别。
- 宋燕杜昕田月如阮斐怡吕元李敏
- 关键词：葡萄球菌感染菌血症
