国家教育部博士点基金(20040161005)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：王绍青王志强王波唐建武更多>>
- 相关机构：大连医科大学大连医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 膜联蛋白A7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株的建立被引量：6
- 2008年
- 目的:建立针对膜联蛋白A7(annexin A7)的shRNA(small hairpin RNA)稳定转染的小鼠肝癌细胞株Hca-F,为后续研究奠定基础。方法:构建3条针对annexin A7的shRNA(shRNA1、2、3) ,分别与pSilencer连接,构建表达载体并分别转染Hca-F细胞,在mRNA和蛋白质水平比较3条shRNA对annexin A7表达的抑制作用,筛选抑制效果最好的shRNA转染Hca-F。稳转后用含400μg/ml G418的完全培养基筛选,获得annexin A7表达稳定下调的Hca-F细胞株后传代扩增,应用Western印迹法检测Hca-F细胞annexin A7蛋白的表达,并与空载体转染组及正常对照组进行比较。结果:经DNA测序鉴定,所得到干扰序列与GenBank中序列一致;筛选出其中shRNA1对annexin A7的表达抑制效果最好。pSilencer-shRNA1转染Hca-F细胞株后,annexin A7蛋白的表达远低于空载体转染组和正常对照组(0.3186 vs 0.7987 ,0.824 3,P<0.05) ,而后二者间无统计学差异。结论:成功建立了annexin A7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株,为后续研究奠定了基础。
- 王志强唐建武王绍青孙成荣王波
- 关键词：RNA干扰转染肝肿瘤淋巴转移
- pCDNA3.1-Annexin A7载体的构建及在Hca-p细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- [目的]构建pCDNA3.1-Annexin A7载体并稳定转染Hca-p细胞。[方法]提取小鼠总RNA,逆转录成cD-NA,PCR扩增,获取Annexin A7 CDS,将PcDNA3.1(+)质粒和Annexin A7 CDS片段行BamH I和EcoR I双酶切,构建并抽提pCDNA3.1-Annexin A7质粒,测序鉴定后转染Hca-p细胞,经400μg/mL G418完全培养基筛选获得pCDNA3.1-Annexin A7载体稳定转染的Hca-p细胞,在蛋白质水平检验Annexin A7的表达并行基因组DNA鉴定。[结果]成功构建pCDNA3.1-Annexin A7载体,经测序鉴定,所得到的载体中的CDS经比对与库中序列一致。pCDNA3.1-Annexin A7载体转染Hca-p细胞后,获得稳定上调表达Annexin A7的Hca-p细胞株;行基因组DNA鉴定,证实pCDNA3.1-Annexin A7已转入Hca-P细胞中,western-b lotting结果显示转染前后蛋白的表达相对值Annexin A7/GAPDH分别为0.43544±0.0112和0.45957±0.0065(P<0.05)。[结论]pCDNA3.1-An-nexin A7的构建并稳定转染Hca-p细胞成功,为通过上调Annexin A7在Hca-P的表达以证实Annexin A7与恶性肿瘤淋巴道转移潜能关系的相关研究打下了基础。
- 王志强唐建武王绍青孙成荣王波
- 关键词：PCR转染肿瘤淋巴道转移
