山东省农业科学院高技术自主创新基金(2006YCX027)
- 作品数：14 被引量：42H指数：5
- 相关作者：王长法杨宏军仲跻峰杨少华高运东更多>>
- 相关机构：山东省农业科学院山东农业大学四川农业大学更多>>
- 发文基金：山东省农业科学院高技术自主创新基金山东省农科院重大成果培育基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛源无乳链球菌CAMP因子(cfb)的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 提取能产生CAMP反应的牛源无乳链球菌山东分离株的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768 bp的ORF,可编码含255个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成相比,第8位Tyr→Cys,第95位Pro→Ser,第126位Thr→Ala的3个氨基酸发生了点突变,同源性为98.4%。成功构建原核表达载体pET32a+/cfb,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为48 kD,表达量占菌体总蛋白的52.7%。这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件。
- 王向柳王长法杨宏军阿合买提·买买提高运东仲跻峰
- 关键词：无乳链球菌克隆
- 金黄色葡萄球菌荚膜多糖的提取及其多糖含量的测定被引量：4
- 2009年
- 为提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖并测定多糖含量。采用超声波破碎菌液,用CTAB结合其中的多糖、CaCl2解离、乙醇沉淀等化学方法提取纯化金黄色葡萄球菌荚膜多糖,利用苯酚-硫酸法测定其含量。结果显示,得到荚膜多糖0.31g,含量为65.06%。结果表明,成功提取金黄色葡萄球菌荚膜多糖,并对其含量进行了测定,初步确定了粗提金黄色葡萄球菌荚膜多糖的方法。
- 孙焕杨宏军胡桂学何洪彬杨少华王长法王洪梅高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌荚膜多糖苯酚-硫酸法
- 奶牛乳腺炎病原学比较研究
- 2008年
- 针对大型奶牛场和部分散养户的奶牛,对乳腺炎阳性和阴性乳汁进行细菌分离培养计数和生化鉴定,对分离到的病原菌做药物敏感性试验。试验中分离出的细菌主要是葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、棒状杆菌和酵母菌。经过生化鉴定,乳腺炎阳性乳分离得到的细菌大多数是明显溶血的,凝固酶反应呈阳性的强致病菌,细菌计数也高于乳腺炎阴性组,差异极显著;而乳腺炎阴性乳中所分离得到的细菌大多是环境中条件性致病菌,致病性不强。
- 杨宏军高运东杨少华仲跻峰赵宏坤
- 关键词：奶牛乳腺炎细菌培养
- 奶牛乳腺炎源性大肠杆菌csgC基因的克隆及载体构建
- 2009年
- 根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列设计了1对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序,结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。该基因与原核表达载体pET32a+相连,转入BL21(DE3)感受态细胞。挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32a+/csgC。
- 王林锋杨宏军杨少华王长法高运东钟跻峰葛利江
- 关键词：大肠杆菌
- 奶牛乳腺炎源性金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因的克隆及原核表达
- 2009年
- 以提取的奶牛乳腺炎源性金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)全基因组DNA为模板,PCR扩增β-溶血素基因(hlb),并与克隆载体pMD18-T相连接。测序结果表明,扩增片段含有993bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白的氨基酸同源性为99.4%。构建原核表达载体pET32a+/hlb,SDS-PAGE分析蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白的相对分子量质为57000,表达量占菌体总蛋白的23.9%;表明原核表达质粒构建成功,并实现了有效表达。
- 杨钦王长法杨宏军杨少华高运东仲跻峰彭广能
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆
- 奶牛乳腺炎大肠杆菌csgC基因的克隆及序列分析
- 根据GenBank上发表的curli菌毛csgc基因序列,设计了一对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,...
- 王林锋杨宏军杨少华王长法高运东仲跻峰葛利江
- 关键词：大肠杆菌
- 文献传递
- 基因工程蛋白金葡菌α-溶血素的纯化及活性检测被引量：1
- 2009年
- 【目的】分离纯化基因工程重组蛋白金黄色葡萄球菌溶血素(α-hemolysin,α-HL)并检测其生物学活性,为疫苗研发奠定基础。【方法】对含pET32a+-α-HL质粒的BL21(DE3)进行诱导表达,诱导成功后,将重组菌BL21(DE3)培养物用超声波裂解,并用凝胶过滤层析法对该基因工程蛋白进行分离纯化,用Bradford法及兔红细胞分别测定纯化产物的蛋白含量和溶血比活。【结果】纯化产物在SDS-PAGE电泳中53ku处呈现出单一清晰带,达电泳级纯度。纯化产物含量约为0.1277mg/mL,溶血比活为8192HU/mg。【结论】成功获得了金黄色葡萄球菌α-HL,且所获的α-HL具有良好的溶血活性。
- 张海燕马卫明杨宏军王长法何洪彬曹永芝
- 关键词：金黄色葡萄球菌溶血活性原核表达
- 金葡菌荚膜多糖血清型的研究进展被引量：1
- 2007年
- 金葡菌是引起奶牛乳腺炎的一种主要的致病菌,致病性金葡菌多数含有荚膜成分,金葡菌荚膜多糖有11种血清型。从不同血清型荚膜多糖的结构,基因构成,抗吞噬作用,致病性等方面作了介绍,并简要介绍了金葡菌荚膜多糖血清型的国内外研究现状。
- 王英杰杨宏军王长法安利国
- 关键词：金葡菌荚膜多糖血清型
- 牛金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2009年
- 根据GenBank上发表的金黄色葡萄球菌β-溶血素基因序列,设计了一对特异性引物。提取临床乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌山东株zfb的全基因组DNA为PCR模板,扩增β-溶血素基因,将PCR产物纯化后连接到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸和1个终止子的成熟蛋白,与已报道的金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白的氨基酸组成同源性为99.4%。软件分析显示,克隆的金葡菌β-溶血素是一种依赖于金属离子的磷脂酶。上述结果显示,已获得金黄色葡萄球菌β-溶血素基因,为获得重组金黄色葡萄球菌β-溶血素蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。
- 杨钦王长法杨宏军杨少华高运东仲跻峰彭广能
- 关键词：金黄色葡萄球菌溶血素克隆
- 奶牛乳腺炎大肠杆菌csgC基因的克隆及序列分析
- 2008年
- 根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列,设计了一对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序。结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。Curli菌毛csgC基因的克隆,为获得重组csgC蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。
- 王林锋杨宏军杨少华王长法高运东仲跻峰葛利江
- 关键词：大肠杆菌
