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整合素-β1在层黏连蛋白促进施万细胞合成细胞外基质过程中的作用被引量：1: 2011年; 目的探讨整合素-β1在层黏连蛋白(LN)促进施万细胞(SCs)合成细胞外基质(ECM)过程中的作用。方法体外培养10只SD大鼠来源的SCs,经外源性LN处理后,双重免疫荧光细胞化学法检测LN和整合素-β1的表达情况,免疫印迹法检测SCs内黏着斑激酶(FAK)的磷酸化水平。用抗体Ha2/5封闭细胞表面受体整合素-β1,再经外源性LN处理后,免疫印迹法检测FAK的磷酸化水平变化,免疫荧光细胞化学法检测SCs合成LN、着位素、Ⅳ型胶原等ECM成分的变化。结果经外源性LN处理后,SCs内LN和整合素-β1均有阳性免疫反应,且局部共表达,SCs内FAK的磷酸化水平增加。封闭细胞表面受体整合素-β1后,SCs内FAK的磷酸化水平明显下降,SCs内LN、着位素、IV型胶原等ECM成分的表达和分布未见明显改变。结论 LN能与SCs表面受体整合素-β1相结合,激发细胞内整合素-β1依赖的FAK磷酸化途径,但LN促进SCs合成ECM的作用并不依赖于整合素-β1介导的信号途径。; 陈雪王雪松李奕陈颖高银峰王晓冬; 关键词：层黏连蛋白施万细胞细胞外基质免疫荧光免疫印迹法

长时间坐骨神经横断伤后远侧端雪旺氏细胞活性变化被引量：1: 2011年; 目的:研究坐骨神经长时间损伤不同时间后远侧端雪旺氏细胞(Schwann cells,SCs)的活性变化。方法:根据坐骨神经横断时间,SD大鼠分4组:正常对照组(A组)、损伤1月组(B组)、损伤2月组(C组)和损伤3月组(D组)。取坐骨神经损伤远侧端和正常坐骨神经进行SCs培养;S-100免疫细胞化学染色等形态学观察细胞形态;应用CCK8试剂检测SCs活力;ELISA定量检测SCs分泌的神经生长因子(nerve growth factor,NGF);以神经元的突起长度为指标来检测各组SCs来源的条件培养液对运动神经元的营养作用。结果:坐骨神经损伤后,其远侧端SCs形态发生改变,其中B组最明显;B组SCs活力最强,C、D组与B组相比均明显下降(P<0.05);SCs分泌的NGF量随着损伤时间的延长而逐渐下降(P<0.05);B组SCs来源的条件培养基中生长的神经元突起长度最长,C、D组与B组相比均短(P<0.05)。结论:周围神经长时间损伤后远侧端SCs发生了形态的改变;其细胞活力,分泌NGF以及促进神经元突起生长方面的能力都发生下降,但并未完全随着损伤时间延长而进一步下降。; 李奕林巍巍陈雪陈颖王晓冬; 关键词：雪旺氏细胞神经损伤神经生长因子

坐骨神经横断后远期体外培养的施万细胞形态及其分泌BDNF和NT3功能的变化: 2011年; 目的观察坐骨神经横断后体外培养的远端施万细胞(SCs)形态及其分泌脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子3(NT3)功能的变化。方法依据坐骨神经横断时间,16只SD大鼠分为横断后1个月组(A1组,3只)、2个月组(A2组,5只)和3个月组(A3组,6只);C组(2只)为正常对照组。取各组横断坐骨神经远端进行SCs培养。免疫荧光染色观察细胞形态;ELISA检测SCs分泌BDNF、NT3水平。结果坐骨神经横断后SCs形态均发生改变,以A1组最为明显。与C组比较,A1组SCs分泌的BDNF增多(P<0.05);A2、A3组BDNF和NT3均较A1、C组明显减少(P<0.05);但A2组与A3组间各指标无统计学差异(P>0.05)。结论坐骨神经横断损伤1个月后,其远端SCs形态发生改变;2个月后BDNF和NT3分泌量下降。; 李奕林巍巍陈雪陈颖王晓冬; 关键词：坐骨神经损伤施万细胞脑源性神经营养因子神经营养因子3

不同浓度BMSCs联合壳聚糖导管对大鼠全横断脊髓损伤修复作用的比较被引量：6: 2011年; 比较不同浓度的骨髓基质干细胞(BMSCs)联合壳聚糖导管移植物在大鼠脊髓全横断损伤模型中的修复作用。体外分离培养大鼠BMSCs,分别以104/mL(A组)、106/mL(B组)和108/mL(C组)的浓度联合壳聚糖导管植入大鼠T8全横断脊髓损伤模型中;术后12周电生理检测结果显示各组大鼠在大脑皮层、损伤平面以下刺激时均能在腓肠肌内记录到运动诱发电位,其中皮层潜伏期C组短于A组,皮层振幅B、C组大于A组(P<0.05);取材后大体观察各组移植物均能和损伤脊髓两端整合良好;尼氏染色显示在再生区域中段神经元数目C组大于A、B组(P<0.05);双重免疫荧光组织化学检测显示再生轴突能穿越胶质瘢痕界面长入损伤远端;电镜观察再生区域内有较多的有髓神经纤维,其中C组的有髓神经数目多于A组,髓鞘厚度大于A、B组(P<0.05)。BMSCs联合壳聚糖导管制成的人工组织移植物可以桥接脊髓损伤造成的缺损,部分恢复电生理特性,促进轴突再生,其中高浓度细胞组(C组)修复效果较好,提示该移植方法可为脊髓损伤的治疗提供新思路。; 杨阳陈雪李奕陈颖高银峰宋戈王晓冬; 关键词：骨髓基质干细胞壳聚糖脊髓损伤

施万细胞对骨髓基质干细胞向神经组织细胞分化诱导的作用被引量：3: 2009年; 背景:骨髓基质干细胞具有向神经组织细胞分化的多潜能特性。以往实验以化学试剂作为诱导剂加入细胞培养液中,在体外成功地诱导出神经组织细胞。目的:观察大鼠施万细胞和骨髓基质干细胞体外共培养后,骨髓基质干细胞能否被诱导向神经组织细胞分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-10在南通大学医学院组织学与胚胎学教研室及江苏省神经再生重点实验室完成。材料:SPF级新生1～3d龄SD大鼠用于制备施万细胞,SPF级成年雄性SD大鼠用于制备骨髓基质干细胞,动物均由南通大学实验动物中心提供。方法:将传2代培养的骨髓基质干细胞和施万细胞分别以1×105和1×106的密度接种于transwell双层6孔细胞培养板的皿底和板底,两种细胞间隔以PET膜,其膜孔径为0.4μm,于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中进行非接触性共培养14d。另外,将施万细胞培养上清作为条件培养基,培养骨髓基质干细胞14d。主要观察指标:光镜下观察共培养后骨髓基质干细胞的形态变化;MTT检测共培养前后骨髓基质干细胞的活性;免疫荧光染色鉴定共培养后骨髓基质干细胞S-100蛋白的表达,流式细胞仪测定S-100蛋白阳性率;免疫荧光染色检测条件培养基培养后骨髓基质干细胞S-100,P75,GFAP的表达。结果:共培养后的骨髓基质干细胞形态发生改变,原来宽大扁平的胞体开始收缩,细胞胞体呈梭形,部分细胞类似施万细胞呈线性排列。共培养前后及条件培养基培养后,骨髓基质干细胞的活力无明显差异(P>0.05)。共培养14d后,骨髓基质干细胞表达施万细胞表面标记S-100蛋白,阳性率达(22.54±2.36)%。条件培养基培养14d后,骨髓基质干细胞表达施万细胞表面标记S-100蛋白,P75,GFAP。结论:施万细胞分泌因子可以诱导部分骨髓基质干细胞向神经组织细胞分化,并表达施万细胞表面标记。; 林巍巍陈雪李奕王晓冬; 关键词：骨髓基质干细胞施万细胞共培养

银杏内酯A在大鼠急性脊髓损伤后对神经修复的作用被引量：6: 2013年; 目的探讨银杏内酯A在大鼠急性脊髓损伤后对神经纤维修复和运动功能恢复的作用。方法 28只SD大鼠随机分为高剂量银杏内酯A组(A1组,6只)、中剂量银杏内酯A组(A2组,6只)、低剂量银杏内酯A组(A3组,6只)、损伤模型组(B组,5只)和假手术组(C组,5只)。损伤后不同时间段对大鼠进行BBB行为学评分,损伤后30d取脊髓损伤区域进行免疫荧光组织化学染色和电镜检测。结果 A1、A2、A3组损伤后的BBB评分均高于B组(P<0.05),A1、A2组BBB评分高于A3组(P<0.05)。A1、A2、A3组均可见神经微丝蛋白免疫反应阳性的再生神经纤维,B组未见阳性神经纤维。电镜观察显示,A1、A2、A3组损伤区域内均可见神经纤维,且A1、A2组的有髓神经纤维数目多于A3组(P<0.05)。结论银杏内酯A在大鼠急性脊髓损伤后能促进神经纤维的修复和运动功能的恢复,且高、中剂量银杏内酯A治疗效果优于低剂量银杏内酯A。; 王雪松徐瑞生孙亚文薛骏吴洁石; 关键词：银杏内酯A 脊髓损伤

L-丝氨酸对大鼠神经细胞凋亡与内源性神经干细胞增生的影响被引量：1: 2013年; 目的观察大鼠急性脊髓损伤（SCI）后L-丝氨酸（L-Ser）抑制神经细胞凋亡与促进内源性神经干细胞（eNSCs）增殖的作用。方法健康SD成年雄性大鼠100只，随机分为5组（n=20）：假手术组（只行椎板切除，小损伤脊髓）、单纯损伤组（制备SCI模刑后腹腔注射生理盐水）、L-Ser治疗组（制备SCI模型后腹腔注射L-Set）、D-环丝氨酸（DCS）治疗组（制备SCI模型后腹腔注射DCS）和DCS拮抗组（制备SCI模型后腹腔注射L-Ser和DCS）。1、3、5、7d观察并记录各组大鼠斜扳试验的斜坡角度和BBB运动评分，观察脊髓前角神经细胞数、榆测细胞凋亡和Brdu和Neslin双标性细胞的表达、结果术后3d开始，L-Ser治疗组的斜坡角度和BBB运动评分均大于单纯损伤组、DCS治疗组和DCS拮抗组，差异有统计学意义（P〈0．05），且随着治疗时间的增加，斜坡角度呈现递增趋势、L-Ser治疗组的脊髓前角神经细胞数和Brdu／Nestin阳性细胞数叫显多于单纯损伤组、DCS治疗组和DCS拮抗组，结论 L-Ser能抑制SCI大鼠脊髓组织中神经细胞的捌亡，促进SCI大鼠脊髓组织cNSCs增殖。; 曹涌姚羽李向阳王晓冬张烽; 关键词：细胞凋亡脊髓损伤丝氨酸内源性神经干细胞

施万细胞的层黏连蛋白表达变化及两者关系的初步研究被引量：5: 2010年; 目的:观察层黏连蛋白(laminin,LN)在坐骨神经发育过程中的表达情况,以及LN和施万细胞(Schwann cells,SCs)的相互关系。方法:取E14、E17、P1和成年SD大鼠坐骨神经,免疫荧光组织化学染色检测LN表达情况;体外培养大鼠来源的SCs,经过外源性LN处理后,免疫荧光细胞化学染色检测LN、nidogen、type IVcollagen等细胞外基质成分的表达,酸性磷酸酶法检测SCs的黏附能力。结果:E17大鼠坐骨神经SCs有LN阳性免疫反应;经过外源性LN处理后,SCs有LN、nidogen、type IV collagen阳性免疫反应,且黏附能力增加。结论:在E17大鼠中,SCs开始分泌LN;LN具有促进SCs合成细胞外基质成分,并在其黏附过程中发挥作用。; 陈雪林巍巍李奕陈颖王晓冬; 关键词：层黏连蛋白施万细胞细胞外基质

分区式脊髓导管联合骨髓基质干细胞修复脊髓横断损伤被引量：1: 2013年; 目的探讨分区式脊髓导管联合骨髓基质干细胞在大鼠脊髓横断损伤模型中的修复作用。方法分区式脊髓导管联合骨髓基质干细胞桥接大鼠T8脊髓5mm全横断损伤，术后3个月观察修复效果。结果电生理检测显示皮层运动诱发电位的潜伏期（5．50±0．35）ms，与对照组比较较短，振幅（65．9±10．2）IxV，比对照组大（P〈0．05）；对桥接中间段进行神经微丝蛋白（NF）免疫荧光组织化学染色，可见再生神经纤维有序排列，电镜观察可见新形成的有髓神经纤维数量为11±4，高于对照组（P〈0．05）。结论分区式脊髓导管联合骨髓基质干细胞可桥接脊髓横断造成的缺损，促进有髓神经纤维再生，重建下行运动神经通路，部分恢复电生理特性。; 王雪松陈雪李奕孙榕呈王晓冬; 关键词：骨髓基质干细胞脊髓损伤

损伤后脑膜成纤维细胞对星形胶质细胞活性及胶质纤维酸性蛋白表达的影响被引量：4: 2012年; 目的体外观察损伤后脑膜成纤维细胞对星形胶质细胞活性及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法体外分别培养SD大鼠大脑皮层的星形胶质细胞和大脑脑膜的成纤维细胞,经GFAP和纤维粘连蛋白(FN)免疫荧光染色鉴定后,将损伤后成纤维细胞来源条件培养基与星形胶质细胞共培养,根据成纤维细胞损伤时间不同分为正常对照组(A组)、损伤4 h组(B组)、损伤24 h组(C组)、损伤72 h组(D组),应用CCK8试剂检测星形胶质细胞的活性,通过GFAP免疫荧光染色观察星形胶质细胞GFAP表达。将损伤的成纤维细胞与星形胶质细胞接触共培养72 h,根据与成纤维细胞的距离,将星形胶质细胞分为近(J)组和远(Y)组,通过FN和GFAP双重免疫荧光细胞化学染色观察GFAP表达。结果 B组星形胶质细胞活性低于A、C、D组(P<0.05);非接触共培养时,C组星形胶质细胞GFAP表达强度显著高于B、D组(P<0.05);接触共培养时,J组星形胶质细胞的GFAP表达强度显著高于Y组(P<0.05)。结论损伤后脑膜成纤维细胞能触发星形胶质细胞反应性胶质化。; 李奕陈雪陈颖林巍巍刘永华朱俊杰费翔刘宇西王晓冬; 关键词：成纤维细胞星形胶质细胞细胞活性胶质纤维酸性蛋白

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