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Taqman-MGB实时荧光PCR定量检测转基因玉米MON863被引量：2: 2012年; 运用实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因玉米MON863进行品种特异性检测和定量分析。通过设计玉米内源基因和外源基因边界序列特异性引物和Taqman-MGB探针,验证了内源基因的物种特异性和外源基因边界序列的品种特异性。利用已知转基因百分含量的MON863玉米作为标准品,进行荧光定量反应,建立定量标准曲线,通过标准曲线对玉米样品MON863玉米成份进行含量分析。结果表明,该方法重复性好,检测特异性强,最低检测限浓度达到0.001 ng/μL,即14个拷贝。由于使用实时荧光PCR技术,检测周期短,操作简便,可广泛运用于转基因玉米MON863的进出口检测和转基因产品的含量分析。; 王凤军冯俊丽张祥林王菁王鹏举; 关键词：实时荧光PCR TAQMAN-MGB探针

PCR结合核酸斑点杂交技术检测转基因番茄研究被引量：1: 2013年; 基于转基因番茄的安全性评价,建立健全番茄转基因检测体系尤为迫切。文章采用转基因作物检测常用的传统定性PCR技术和核酸斑点杂交技术,针对转基因番茄中常用的35S(花椰菜花叶病毒启动子)、NOS(胭脂碱合成酶终止子),NPTII(新霉素转移酶基因),35S-EFE(35S和番茄EFE基因的交联结构)、以及Lat52(番茄内参基因),检测了阳性对照质粒PBI121、华蕃一号样品和阴性对照合作903番茄。从华蕃一号中成功检出35S、NOS、NPTII、35S-EFE和内参基因Lat52,阴性对照番茄合作903中只有内参基因Lat52检出。试验重复性良好,检测灵敏度高,两种方法相互补充,排除假阳性。核酸斑点杂交一次可检出多个外源基因,增加了检测通量,为我国番茄转基因检测提供参考。; 梁彦君陈文虎王梦娜许爱霞冯俊丽; 关键词：转基因番茄核酸斑点杂交

实时荧光定量PCR快速检测四种蛀果性害虫被引量：1: 2015年; 苹果蠹蛾、香梨优斑螟、梨小食心虫及地老虎是危害新疆香梨等产品的重要害虫,前3种也属于国际上检验检疫重要虫害。目前,国内主要依靠虫体的形态特征对其进行鉴定,缺少分子生物学检测手段,这限制了我国香梨等产品的生产和出口贸易发展。首先得到这4种害虫的16S r DNA COI基因片段,在差异序列设计特异性的引物和探针,利用实时荧光定量PCR技术建立快速分子检测试验体系,依据标准曲线分析检测体系的重复性和灵敏性。结果表明,苹果蠹蛾、香梨优斑螟、梨小食心虫及地老虎最低检出限分别在1.605×10-2、0.729×10-2、0.475×10-2和0.818×10-2 ng/μL,满足检验检疫日常检测需求。为克服实际检测过程中经常会出现某一虫的残片样本或者几种虫聚集在一起的混合样本,使用了单头、多头DNA样本及4种害虫的混合DNA样本进行检测分析,进一步验证了该方法的特异性,可靠性和可适用性。; 王凤军刘莎莎冯俊丽; 关键词：苹果蠹蛾香梨优斑螟梨小食心虫地老虎

枣褐斑病菌实时荧光PCR快速检测方法研究被引量：3: 2014年; 根据枣褐斑病原菌链格孢子基因组保守序列,设计特异性引物和双荧光标记探针,建立了枣褐斑病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法。此外,还对其他2种红枣植物病害病原菌和6种链格孢菌种进行了荧光PCR检测。结果表明,只有枣褐斑病菌产生荧光信号,其他病原菌均没有荧光信号产生。与常规PCR相比,TaqMan实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为1.4pg/μL的DNA样本。该方法全程不必通过病原菌的分离与纯化培养,可直接用于病变样品的检测以及枣褐斑病的筛查与动态监测,适合枣褐斑病的快速诊断和分子监测。; 王凤军张祥林谭志文马海波冯俊丽王鹏举; 关键词：链格孢菌实时荧光PCR

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国家质检总局科技计划项目(2012IK290)