“九五”国家科技攻关计划(96-C01-04-03)
- 作品数：17 被引量：133H指数：6
- 相关作者：陈焕春方六荣何启盖郭万柱徐志文更多>>
- 相关机构：华中农业大学四川农业大学广东省兽医生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 伪狂犬病病毒鄂A株gG^-/LacZ^+突变株的构建被引量：11
- 2001年
- 以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A株为亲本 ,提取其基因组DNA ,克隆含 gG基因的SphⅠ /KpnⅠ片段 ,然后将LacZ基因融合到 gG启动子下游 ,得到重组质粒 pUSKZ ,将重组质粒与鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待细胞完全病变后 ,在X gal存在下 ,作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和PCR扩增证实得到的是基因型为 gG- /LacZ+ 的重组伪狂犬病病毒。
- 周复春陈焕春方六荣周锐吴斌何启盖
- 关键词：伪狂犬病病毒鄂A株突变株
- PRV广东株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定
- 2001年
- 根据伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株gE基因的序列设计并合成了 1对引物 ,以我国PRV地方毒株广东株的基因组DNA为模板 ,通过PCR方法获得了一大小约 1 6kb的DNA片段 ,并将其克隆到pMD18_T载体上进行测序 .序列测定结果显示 ,该片段长 16 6 5bp ,编码 5 5 5个氨基酸 ,与PRVRice株gE基因的核苷酸序列同源性为 97 7%,氨基酸序列同源性为 95 9%
- 敖敬群娄高明杨林龙綮新王珣章
- 关键词：伪狂犬病病毒PCR扩增基因克隆
- 伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定被引量：3
- 2001年
- 根据已经发表的伪狂犬病病毒 (PRV) Rice株的 g E基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,通过 PCR方法扩增到了PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,并克隆到 p MD18- T载体中 ,转化大肠杆菌 XL1- blue菌株。重组质粒 p MD18- T- FL经酶切和 PCR鉴定证实后 ,进行了序列测定。结果表明 ,重组质粒 p MD18- T- FL含有PRV闽 A株糖蛋白 g E基因除信号肽以外的全部编码区段 ,长 16 74bp。序列比较分析表明 ,此区段与 PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为 97.5 % ,氨基酸序列同源性为 94.8%
- 娄高明敖敬群杨林杜伟贤王珣章
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因基因克隆PCR
- 伪狂犬病病毒PK基因的克隆与PK、gG双缺失转移载体的构建被引量：6
- 2006年
- 地高辛标记伪狂犬病病毒(PRV)E a株短区段蛋白激酶(PK)基因3′端0.4 kb片段,Sou thern杂交确定短区段PK基因定位在基因组DNA B amHⅠ4.0 kb片段中。将该片段克隆获得重组质粒pSB 304,对pSB 304亚克隆,构建了仅含完整PK基因约1.3 kb片段的重组质粒pSB 305,并进行了序列测定。结果表明,PK基因存在2种可能的同框编码方式,分别编码388或334个氨基酸残基,并具有真核细胞蛋白激酶催化结构域序列。同国外PRV N IA-3、K a株相比,氨基酸同源性分别为98.8%和97.3%,有意义的是E a株、K a株均较N IA-3株在同一位置缺失2个氨基酸(A sp,G ly)。进一步对pSB 305和含gG全基因以及部分gD基因的质粒pU SK进行酶切拼接,将PK基因大部分编码区、gG基因5′端部分编码区进行缺失,构建成两端同源侧翼分别为3.1 kb和1.6 kb的PK、gG双缺失转移载体pLR 001。上述结果为深入研究PK基因功能及研制更安全的TK-/PK-/gG-三缺失基因工程疫苗奠定了基础。
- 方六荣肖少波姚林潘永飞谢京国陈焕春
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)某些生物学特性研究被引量：17
- 2000年
- 本试验测定了伪狂犬病ｇＥ－／ｇＩ－／ ＴＫ－／ ＬａｃＺ＋基因缺失疫苗株（ＳＡ２１５）的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和免疫期等生物学特性。试验结果显示，该疫苗株能在Ｖｅｒｏ细胞上适应生长，并形成典型的蚀斑。其对１日龄仔猪、怀孕母猪、牛、羊以及家兔安全，无不良接种反应，接种动物不向体外散毒。ＳＡ２１５疫苗接种猪能抵御高剂量（１０７ＰＦＵ）Ｆａ株强毒感染，攻毒后试验猪的发热期、增重受阻天数、散毒滴度均低于Ｂａｒｔｈａ株疫苗接种猪，远远低于对照组猪。ＳＡ２１５接种猪能维持长时间的高水平中和抗体滴度，免疫期可达半年以上。试验结果表明，ＳＡ２１５株是一株安全、免疫原性好、免疫期长的疫苗株。
- 陈陆郭万柱徐志文徐静王小玉
- 关键词：伪狂犬病生物学特性免疫原性
- 伪狂犬病防制策略及我国应采取的对策被引量：5
- 2001年
- 伪狂犬病病毒 (PRV)是α疱疹病毒属的一个成员 ,为伪狂犬病的病原。猪是伪狂犬病病毒的自然宿主。该病原一旦感染猪 ,则产生潜伏感染 ,其致死率随猪年龄的增加而降低。由于伪狂犬病的暴发引起畜牧业的巨大经济损失 ,许多国家都进行免疫接种预防该病。而该病在不同的国家或地区危害不同 ,所造成的经济损失也不一样 ,另外各国的经济发展不平衡 ,因此对该病所采取的防制策略亦有所不同。文章综述了美国、日本、欧共体及其成员国之间对伪狂犬病采取的防制策略及取得的进展 ,并根据我国伪狂犬病的流行现状 ,提出了应采取的控制策略。
- 娄高明杜伟贤
- 关键词：伪狂犬病防制策略
- 伪狂犬病病毒Ea株gE基因主要抗原表位区的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2001年
- 以伪狂犬病病毒 Ea株为模板 ,通过 PCR扩增含 g E基因主要抗原表位区的 80 1 bp的片段 ,扩增产物酶切后克隆于 p Bluescript SK+ 中 ,双脱氧末端终止法测定序列并同国外 Rice株进行同源比较。将该片段插入原核表达载体 p ET-1 7b的 T7噬菌体启动子下游 ,构建的原核表达质粒 p ETE80 4在大肠杆菌 BL2 1( DE3 )中获得了高效表达。 SDS-PAGE结果显示 ,表达的蛋白 Mr为 380 0 0 ,并形成包涵体。 Western印迹分析表明 ,该蛋白能与 Ea株野毒高免血清发生特异性反应 ,但与 g E缺失的 Bartha株高免血清不反应。上述结果说明 ,该原核表达产物不仅具有生物学活性 。
- 肖少波陈焕春方六荣何启盖徐引娣
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因抗原表位克隆
- 伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中的表达与gE乳胶凝集鉴别诊断方法的建立被引量：3
- 2002年
- 将伪狂犬病病毒 (PRV)Ea株 gE 基因主要抗原表位区段融合到原核表达载体 pET2 8b的T7启动子下游 ,构建成原核表达质粒 ,经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和Westernblot印迹分析 ,证实 gE 基因主要抗原表位区在大肠杆菌中获得了表达 ,表达产物具有抗原性 ,分子量为 38kD ,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理 ,复性产物致敏乳胶 ,并对抗原致敏浓度、致敏时间、致敏温度进行优化 ,建立了gE乳胶凝集试验 (gE -LAT)。该方法不仅能显著区分 gE 基因缺失疫苗免疫猪血清和野毒感染猪血清 ,而且具有简便、快速等优点。检测临床 36 0份猪血清 ,阳性率为 5 7 78% (2 0 8/ 36 0 ) ,比国外阻断 gE -ELISA的 5 8 0 6 % (2 0 9/ 36 0 )略低 ,阳性符合率为 94 86 % (2 0 3/ 2 14 ) ,总符合率为 96 94 % (349/ 36 0 ) ,两种检测方法结果差异不显著 (P >0 0 5 )。
- 唐勇陈焕春肖少波覃雅丽何启盖任裕其
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因大肠杆菌鉴别诊断方法
- 伪狂犬病病毒Fa株gp63(gI)基因核苷酸序列测定及分析被引量：4
- 2001年
- 对我国最早分离的伪狂犬病病毒 ( pseudorabies virus,PRV) Fa株糖蛋白 gp6 3( g I)基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列作了测定与分析。完整的 gp6 3( g I)结构基因从起始密码子 ATG到终止密码子 TGA共有1 0 50个核苷酸残基 ,编码由 34 9个氨基酸残基构成的多肽链。 4种核苷酸残基的构成比分别为 :G35.9% ,A1 1 .33% ,T1 1 .81 % ,C4 0 .95% ,G+C含量达 76 .85%。PRV Fa株 gp6 3基因核苷酸序列与 Nice株的相比 ,两者同源性达 98.1 3% ,仅存在 3个核苷酸残基的缺失变异 ;氨基酸推导序列分析表明 ,糖蛋白 gp6 3具有典型膜蛋白特征 ,与 Nice株相比 ,同源性为 97.4 2 %。 gp6 3基因起始密码子由 3个连续的 ATG组成 。
- 周煜郭万柱汪铭书颜其贵
- 关键词：伪狂犬病病毒核苷酸序列重组质粒
- 伪狂犬病病毒Ea株gE基因的克隆、序列分析及其表达被引量：4
- 2002年
- 对含伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PrV）Ea株gD基因部分编码序列,gI、gE和11k基因全序列、28k基因部分序列的质粒pSKB4.5进行亚克隆,构建了只含完整gE基因（长1.78kb）的重组质粒pSDM1.78+,并采用双脱氧末端终止法对全序列进行了分析,发现同国外标准毒株Rice株相比较,在核苷酸和氨基酸水平均存在一定程度的差异。进一步将gE基因克隆到高效真核表达载体pcDNA3.1+的KpnI和BamHI位点之间,构建了gE基因的真核表达质粒pcDNA-gE。体外转染 IBRS-2细胞,经间接免疫荧光法检测证实了gE基因在IBRS-2细胞中得到了表达,表达的蛋白具有生物学活性。
- 肖少波陈焕春方六荣何启盖洪文洲
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因克隆体外表达
