国家科技重大专项(2008ZX08011-003)
- 作品数：13 被引量：83H指数：6
- 相关作者：史建荣杨永华徐剑宏祭芳丁伟更多>>
- 相关机构：南京农业大学江苏省农业科学院东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项高等学校科技创新工程重大项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 转基因小麦田土壤细菌16S rDNA V3片段的DGGE分析被引量：4
- 2011年
- 为长期监测转基因作物对土壤微生物菌群变化的影响提供可靠的试验方法。以检测转基因小麦田土壤细菌菌群变化为例,利用细菌特异性引物,扩增得到了土壤细菌16S rDNA V3可变区片段;通过变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE),分析PCR扩增得到的V3可变区片段;根据电泳条带的变化情况评价转基因小麦对土壤环境微生物的安全性。结果表明该方法所提取的DNA,可以不经过纯化直接进行PCR扩增等后续试验;DGGE图谱中条带清晰。该方法可作为长期监测土壤微生物种群变化的试验手段。
- 丁衬衬周艳红林凡云徐剑宏吴季荣祭芳史建荣
- 关键词：DNA提取变性梯度凝胶电泳转基因小麦
- 转Bt基因抗虫玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态被引量：8
- 2010年
- 【目的】研究转cry1Ab杀虫蛋白基因玉米收获后玉米根茬及其根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解动态,比较两种Bt玉米根茬和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解速度。【方法】以两种表达Cry1Ab杀虫蛋白的Bt抗虫玉米MON810和Bt11为材料,采用ELISA方法测定玉米收获后根茬残体和根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的田间降解动态。【结果】转Bt基因玉米根茬残体和根际土壤中杀虫蛋白是逐渐降解的,Bt玉米MON810根茬中Cry1Ab杀虫蛋白含量较高,降解的速度也较慢,收获后8个月时还不能完全降解;Bt玉米Bt11根茬中Cry1Ab杀虫蛋白含量较低,降解速度比MON810根茬中Cry1Ab杀虫蛋白降解速度快,到7个月时已检测不到Cry1Ab杀虫蛋白。Bt玉米MON810根际土壤中Cry1Ab杀虫蛋白的降解较Bt11的慢,MON810和Bt11根际土壤分别在8个月和7个月时检测不到Cry1Ab杀虫蛋白。【结论】种植过Bt11和MON810抗虫玉米的田块,在第二年春播农作物已经出土时,其根茬和根际土壤中残留的Cry1Ab杀虫蛋白尚不能完全降解,还有少量残留。
- 邢珍娟王振营何康来白树雄
- 关键词：BT玉米根际土壤CRY1AB杀虫蛋白
- 转基因小麦根际土壤镰刀菌Real-time QPCR方法的建立及应用被引量：2
- 2012年
- 对转基因抗病小麦根际土壤中镰刀菌含量进行绝对定量,建立了实时荧光定量PCR(Real-time QPCR)检测体系。应用该反应体系,对转基因小麦各个生长时期的镰刀菌拷贝数进行绝对定量。结果表明,镰刀菌通用引物具有较好的特异性;Real-time QPCR反应的扩增曲线中各梯度标准质粒的循环阈值间隔均匀,溶解曲线峰值较突出,该标准曲线的相关系数(r)=0.999 20,斜率为-3.203,计算其扩增效率为105%,符合荧光定量PCR方法中对各项指标的要求。应用试验结果表明,在转基因小麦的播种前期、灌浆期、成熟期镰刀菌数量较低,在苗期、返青期、拔节期镰刀菌数量较高。
- 王秀宇林凡云吴季荣曹欢史建荣
- 关键词：转基因小麦镰刀菌实时荧光定量PCR
- 转双价抗真菌病害基因大豆对根际土壤微生物群落结构的影响被引量：14
- 2010年
- 采用传统的平板计数法和变性梯度凝胶电泳技术,对转chi＋rip（几丁质酶和核糖体失活蛋白）双价抗真菌基因大豆转基因G0431以及其亲本非转基因大豆黑农35种植后的根部土壤可培养细菌（含芽胞杆菌、产荧光假单胞菌）、真菌、放线菌进行平板计数及细菌和真菌的群落结构分析.结果表明,二者根部土壤可培养细菌（含芽胞杆菌和产荧光假单胞）、真菌和放线菌的数量并无显著差异;此外,变性梯度凝胶电泳图谱的聚类分析结果显示,时间变化是造成根部土壤细菌和真菌群落结构变化的主要因素,而同一时间内转基因G0431和黑农35根部土壤的细菌和真菌群落结构之间并无显著不同.在大豆的整个生长期内,根部土壤细菌群落多样性指数为5.32～5.37,群落分布均匀度指数为0.91~0.95;根部土壤真菌群落多样性指数为4.78～4.91,群落分布均匀度指数为0.81～0.89.以上结果说明,几丁质酶和核糖体失活蛋白双价基因的导入并没有对大豆根际可培养细菌（含芽胞杆菌和产荧光假单胞）、真菌和放线菌的数量以及细菌和真菌的群落结构产生显著影响.
- 周琳束长龙黄文坤朱延明宋福平张杰
- 关键词：转基因大豆变性梯度凝胶电泳土壤微生物群落结构
- Cre-loxp系统在构建大库容噬菌体抗体库中的应用
- 2009年
- 以杂交瘤细胞技术为基础的单克隆抗体技术已经得到了广泛的应用,但此技术所得抗体要经过动物免疫、细胞融合以及克隆,选择周期长、过程复杂。近年来,噬菌体抗体(Phage antibody libraries)技术发展迅速,用该技术可以不经免疫即可得到大量的抗体,实现抗体的快速、大量制备。一个有效的抗体库至少要达到109的库容量,抗体库的库容量越高,抗体的亲和性越高。Cre-loxp体内重组系统可以有效增大抗体库的库容性,保证库多样性,因此为高容量抗体库的发展提供了有利的工具。本文介绍了抗体库、Cre-loxp系统以及其在构建大容量抗体库中的应用。
- 刘昌来史建荣祭芳徐剑宏
- 关键词：免疫噬菌体抗体库
- 转基因抗旱大豆对土壤酶活性的影响被引量：9
- 2010年
- 采用盆栽试验,在正常水分管理和干旱胁迫条件下研究了转DREB基因抗旱大豆对土壤脲酶、纤维素酶、磷酸酶和过氧化氢酶活性的影响。结果表明,转基因抗旱大豆和非转基因大豆在正常土壤水分管理下,根际土壤中脲酶、纤维素酶、磷酸酶和过氧化氢酶活性在大豆VE、R1、R4期无显著差异。在干旱胁迫下,转基因抗旱大豆和非转基因大豆在VE和R1期土壤脲酶活性显著降低,R1和R4期土壤纤维素酶活性显著降低,R1期土壤磷酸酶活性分别呈显著增高和显著降低趋势,VE和R4期磷酸酶活性分别表现显著降低和无影响的作用,对土壤过氧化氢酶活性无显著影响。
- 乔琦丁伟李新海马有志王振华李文滨
- 关键词：脲酶纤维素酶磷酸酶过氧化氢酶
- 根际箱种植条件下富含硫氨基酸转基因大豆对土壤微生物群落结构的影响被引量：2
- 2013年
- 采用磷脂脂肪酸(PLFA)方法测定了根际箱种植条件下富含硫氨基酸转基因大豆品系OE-8、OE-7、RNAi-3及其受体南农88-1和17-4、21-8、57及其受体N2899对根际土壤微生物群落结构的影响。结果表明:与受体南农88-1根际土壤微生物的磷脂脂肪酸相比,转基因品系OE-8的12Me14∶0、15∶0、17∶0、cy17∶0、10Me17∶0、10Me18∶0、20∶1ω9、18∶2ω6,9cc含量显著提高,转基因品系OE-7的14Me15∶0、16∶0、20∶1ω9含量存在显著差异,转基因品系RNAi-3的14Me15∶0含量显著提高,3个转基因品系根际土壤微生物磷脂脂肪中缺失15Me16∶1ω5,但出现20∶1ω9和18∶2ω6,9cc;与受体N2899根际土壤微生物的磷脂脂肪酸相比,转基因品系17-4的15∶0、14Me14∶0、16∶1ω7c、16∶0、cy17∶0、10Me17∶0、18∶1ω8、cy19∶0含量发生改变,转基因品系21-8的14Me16∶0、cy19∶0缺失,转基因品系57的所有磷脂脂肪酸含量显著提高,3个转基因品系根际土壤微生物磷脂脂肪中出现18∶1ω2。对单个PLFA含量进行的主成分分析显示,花期转基因品系土壤总体微生物群落结构发生了改变,与受体相比变化较大的转基因品系有OE-7、RNAi-3、17-4和57。
- 刘根林桂恒彭欣陈丰戚金亮喻德跃杨永华
- 关键词：转基因大豆土壤微生物群落磷脂脂肪酸
- 转DREB3基因抗旱大豆对土壤微生物群落及有益微生物的影响被引量：7
- 2011年
- 采用盆栽试验方法,在正常水分管理和干旱胁迫条件下研究了转DREB3基因抗旱大豆对土壤细菌、放线菌、真菌及两种有益菌木霉菌和自生固氮菌数量的影响。结果表明,在正常水分管理条件下,只有VE期转基因抗旱大豆根际土壤中细菌数量显著增多,放线菌数量显著减少。干旱胁迫下,转基因抗旱大豆根际土壤中放线菌数量也只在R1期与正常水分管理相比显著减少。转基因大豆在正常水分管理下的R1、R4期和干旱胁迫下的VE、R4期,对根际土壤细菌、放线菌、真菌、木霉菌和自生固氮菌数量无显著影响。
- 曹阳丁伟李新海马有志王振华李文滨
- 关键词：根际土壤微生物群落有益微生物
- DP-305423转基因大豆PCR检测方法研究被引量：4
- 2011年
- 根据DP-305423外源插入片段与植物基因组序列设计特异性引物,以lectin基因(118 bp)作为内参照基因,筛选最佳引物并对反应程序和反应体系进行优化,最终建立转基因大豆DP-305423转化体特异性定性PCR检测方法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性和重复性测试。结果表明:该方法能够特异性检测出DP-305423大豆;DP-305423转基因大豆及其受体按质量比进行混合,检测其灵敏度达到0.05%,约为20个起始模板拷贝;以DP-305423大豆DNA质量分数为1.00%、0.10%、0.05%的样品为模板,其稳定性好、重复性高,假阴性率为0。本试验设计的方法适用于DP-305423转基因大豆特异性定性PCR检测。
- 吕智超李飞武周宁闫伟王丕武张明
- 根际箱种植富含硫氨基酸转基因大豆对土壤硫转化酶活性及微生物功能多样性的影响被引量：6
- 2014年
- 为研究转基因作物的土壤生态安全性,于根际箱中种植2组大豆(A组:转基因品系OE-8、OE-7、RNAi-3和受体南农88-1;B组:转基因品系Gaga1 17-4、Gaga1 21-8、Gaga1 57和受体N2899),采集大豆花期根际土壤,分析硫元素含量和芳基硫酸酯酶活性,并采用Biolog微平板法,研究相比于受体,转基因品系对土壤微生物群落功能多样性的影响。结果表明:OE-8和RNAi-3与其受体相比,根际土壤硫元素含量显著降低;2组组内对比结果显示,根际土样芳基硫酸酯酶活性差异均不显著。Biolog GN/GP/FF/ECO系统及多样性指数分析显示:A组中RNAi-3根际土壤微生物群落活性显著低于受体,微生物群落的丰富度、多样性和均度显著降低,OE-7根际土壤微生物群落的丰富度和均度显著降低;B组中Gaga1 57和Gaga1 17-4根际土壤微生物群落的丰富度、多样性和均度显著下降。
- 刘根林戚金亮喻德跃杨永华
- 关键词：土壤硫
