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国家自然科学基金(21276110)

作品数:9 被引量:35H指数:3
相关作者:饶志明徐美娟张显杨套伟许正宏更多>>
相关机构:江南大学北京联合大学中国科学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学
  • 3篇化学工程
  • 3篇轻工技术与工...
  • 1篇医药卫生

主题

  • 3篇芽孢
  • 3篇芽孢杆菌
  • 3篇枯草芽孢杆菌
  • 2篇乙酰乳酸脱羧...
  • 2篇乳酸
  • 2篇酶学性质
  • 2篇Α-乙酰乳酸...
  • 2篇MYCOBA...
  • 1篇代谢
  • 1篇代谢工程
  • 1篇钝齿棒杆菌
  • 1篇氧化还原酶
  • 1篇乙偶姻
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量
  • 1篇诱导型
  • 1篇诱导型启动子
  • 1篇粘质沙雷氏菌
  • 1篇溶氧
  • 1篇实时荧光

机构

  • 7篇江南大学
  • 1篇北京联合大学
  • 1篇中国科学院

作者

  • 7篇饶志明
  • 4篇徐美娟
  • 4篇张显
  • 2篇杨套伟
  • 2篇许正宏
  • 1篇李会
  • 1篇马延和
  • 1篇张博慧
  • 1篇赵有玺
  • 1篇李静静
  • 1篇薛燕芬
  • 1篇赵晓静
  • 1篇邵明龙
  • 1篇张乐乐
  • 1篇李欣
  • 1篇徐虹

传媒

  • 3篇食品与生物技...
  • 2篇微生物学报
  • 1篇食品与发酵工...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇Scienc...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2019
  • 1篇2018
  • 4篇2015
  • 1篇2014
  • 2篇2013
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
表达3-甾酮-△^(1)-脱氢酶降解植物甾醇合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮被引量:8
2015年
构建分枝杆菌表达载体pMTac并在分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12中加强表达甾醇降解过程中的关键酶3-甾酮-△1-脱氢酶(KSDD)以提高雄甾-1,4-二烯-3,17-二铜(ADD)的产量。将p MF41的启动子pACE替换成tac启动子构建载体pMTac,在分枝杆菌中分别表达报告基因绿色荧光蛋白(GFP)和关键酶KSDD,通过GFP亮度和KSDD酶活验证tac启动子在M.neoaurum JC-12中的效果,并发酵验证加强表达KSDD对产物ADD的影响。荧光显微照片表明两个载体均能在M.neoaurum JC-12表达GFP,但tac启动子的效果比pACE强。酶活测定结果为重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd破碎细胞上清液中KSDD酶活比原始菌提高了6.53倍,比M.neoaurum JC-12/pMF41-ksdd提高了4.36倍。摇瓶发酵显示重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd ADD的产量比原始菌提高了22.2%,由4.86 g/L提高到5.94 g/L,而AD的产量由0.92 g/L减少到0.17 g/L,降低了81.5%;与M.neoaurum JC-12/p MF41-ksdd比,ADD产量提高了12.7%,AD降低了71.2%。以20 g/L植物甾醇为底物,5 L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC-12/pMTac-ksdd的ADD产量达到10.28 g/L。结果表明,构建的新型表达载体pMTac适用于在M.neoaurum JC-12中加强表达关键酶KSDD,而且在M.neoaurum JC-12中过量表达KSDD有助于ADD产量的提高,为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。
张乐乐张显邵明龙陈榕榕饶志明李会许正宏
关键词:MYCOBACTERIUM17-二酮
利用代谢工程构建高产乙偶姻枯草芽孢杆菌被引量:2
2015年
乙偶姻是枯草芽孢杆菌的主要胞外产物,在代谢工程育种中,阻断目标产物的降解途径或加强目标产物前体物的代谢通量是有效提高目的产物积累量的重要手段。该研究克隆了来自枯草芽孢杆菌JNA 3-10的α-乙酰乳酸合成酶(ALS)和α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)基因als S和als D。在大肠杆菌BL21中分别对ALS和ALDC进行表达、纯化和初步的酶学性质研究,随后将ALS、ALDC、ALS+ALDC分别在乙偶姻还原酶敲除菌株(BM)中进行过量表达,发现3株重组菌株的乙偶姻产量与BM菌株相比分别提高了5.2%、4.1%和10.8%,最终乙偶姻产量达到53.5 g/L,生产效率为0.50 g/(L·h)。
张显赵晓静李欣饶志明
关键词:乙偶姻枯草芽孢杆菌代谢工程Α-乙酰乳酸脱羧酶
Halogranum amylolyticum TNN58全基因组测序及PHBV代谢途径分析
2018年
解淀粉盐颗菌TNN58(Halogranum amylolyticum TNN58)是一株极端嗜盐古菌,它可以利用葡萄糖积累3HV摩尔分数高达20%的PHBV。首次通过鸟枪法对H.amylolyticum TNN58进行了全基因组测序,利用Velvet软件进行组装,得到32个支架序列,整个基因组大小约为4.71Mb,测序深度为218X。通过对基因组数据进行分析,发现该菌株PHA合酶由pha E和pha C两个亚基组成,存在4条3-HV的供应途径,同时发现该菌株不存在乙醛酸循环途径,但存在甲基天冬氨酸循环途径作为乙酸盐的回补利用途径。本研究的结果为揭示H.amylolyticum TNN58的PHBV合成机制和后续的功能基因组学研究的提供了数据。
赵有玺薛燕芬薛燕芬马延和
关键词:PHBV基因组
一种耐低温α-乙酰乳酸脱羧酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达被引量:5
2013年
从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中。SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilisWB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103。采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8%。该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20~35℃范围内均表现出较高的活性。Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失。经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍。经5 L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL。
李静静徐美娟张显饶志明
关键词:枯草芽孢杆菌Α-乙酰乳酸脱羧酶耐低温双乙酰酶学性质
Mutation breeding of high 4-androstene-3,17-dione-producing Mycobacterium neoaurum ZADF-4 by atmospheric and room temperature plasma treatment被引量:1
2015年
Steroid medication is used extensively in clinical applications and comprises a large and vital part of the pharmaceutical industry. However, the difficulty of separating 4-androstene-3,17-dione (AD) from 1,4-androstadiene- 3,17-dione (ADD) restricts the application of the microbial transformation of phytosterols in the industry. A novel at- mospheric and room temperature plasma (ARTP) treatment, which employs helium as the working gas, was used to generate Mycobacterium neoaurum mutants producing large amounts of AD. After treatment of cultures with ARTP, four mutants were selected using a novel screening method with a color assay. Among the mutants, M. neoaurum ZADF-4 was considered the best candidate for industrial application. When the fermentation medium contained 15 g/L phytosterols and was cultivated on a rotary shaker at 160 r/min at 30 ~C for 7 d, (6.28+0.11) g/L of AD and (0.82+0.05) g/L of ADD were produced by the ZADF-4 mutant, compared with (4.83+0.13) g/L of AD and (2.34+0.06) g/L of ADD by the original strain, Iv~. neoaururn ZAD. Compared with ZAD, the molar yield of AD increased from 48.3% to 60.3% in the ZADF-4 mutant. This result indicates that ZADF-4 may have potential for industrial production of AD.
Chao LIUXian ZHANGZhi-ming RAOMing-long SHAOLe-le ZHANGDan WUZheng-hong XUHui LI
钝齿棒杆菌溶氧诱导型启动子的筛选及其功能验证被引量:1
2013年
【目的】筛选钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5内源溶氧诱导型启动子,验证其在不同溶氧条件下受溶氧调控的功能。【方法】以本课题组前期利用双向电泳结合质谱鉴定技术分离鉴定出的高低供氧条件下钝齿棒杆菌SYPA5-5胞内的显著差异蛋白(27个)为基础,结合棒杆菌基因组信息分析高低溶氧状态下显著差异蛋白中单位拷贝的表达量,以其中单位拷贝表达量高的蛋白为目的蛋白,克隆目的蛋白编码基因的上游启动子,分别替换棒杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒pDXW-8的外源tac启动子,在大肠杆菌和钝齿棒杆菌中表达报告基因gfp和cat,并检测其表达效率。【结果】筛选出高溶氧上调蛋白转酮醇酶和延胡索酸水化酶作为目的蛋白,克隆其启动子区命名为P-tkt和P-fum。在重组大肠杆菌和重组钝齿棒杆菌中,P-tkt在高溶氧条件下CAT活性是低溶氧条件下CAT活性的2.8和3.2倍。该结果在5 L发酵罐中得到验证。【结论】启动子P-tkt为首次筛选到的钝齿棒杆菌内源性高溶氧诱导型启动子,适用于高溶氧条件发酵生产氨基酸的菌株中,有利于在高供氧条件下提高棒杆菌中氨基酸的合成代谢能力。
张博慧徐美娟饶志明许正宏
关键词:钝齿棒杆菌诱导型启动子
温度对粘质沙雷氏菌合成灵菌红素的影响被引量:15
2014年
【目的】研究粘质沙雷氏菌(Serratia marcecens JNB5-1)在不同发酵温度(28℃和37℃)条件下蛋白质组的差异表达,探究粘质沙雷氏菌合成灵菌红素受温度调控的原因。【方法】利用二维凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术(MALDI-TOF-MS)分离和鉴定粘质沙雷氏菌在不同发酵温度(28℃和37℃)条件下的差异蛋白;再利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进一步分析挑选出的七个差异蛋白编码基因的转录水平。【结果】2-DE图谱显示,共鉴定到16个显著差异的蛋白点。其中,灵菌红素合成途径中的氧甲基转移酶(PigF)、氧化还原酶(PigN)和参与灵菌红素前体物质(脯氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、二辛烯醛和丙二酰-CoA等)代谢的相关蛋白(酶)的表达量在37℃条件下都出现极显著的下降;热休克蛋白(Hsp60)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)等应急性蛋白在37℃条件下表达上调。通过RT-qPCR证实,氧甲基转移酶、氧化还原酶和转酮醇酶基因(transketolase)在37℃条件下的转录水平均低于28℃条件下的。【结论】S.marcecens JNB5-1在相对低温(28℃)条件下产灵菌红素,相对高温(37℃)条件下不产灵菌红素。可能是高温(37℃)显著抑制了灵菌红素合成相关酶的表达。
徐虹徐美娟杨套伟饶志明
关键词:氧化还原酶实时荧光定量PCR温度调控粘质沙雷氏菌
Biosynthesis, property comparison, and hemocompatibility of bacterial and haloarchaeal poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate)被引量:1
2015年
Polyhydroxyalkanoates (PHAs) are a class of natural biopolyesters accumulated intracellularly by many microorganisms. These polymers have attracted particular attention as green plastic in biomedical and industrial applications due to their good biodegradability and bio- compatibility. Poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvaler- ate) (PHBV) is one of the most common members of PHAs. However, there is no report comparing the properties of PHBV from different groups of producers, e.g., bacteria and haloarchaea. In this study, two types of PHBV copolymers were synthesized in Halogranum amylolyticum and Ralstonia eutropha, respectively, by feeding different carbon sources. They possessed a similar concentration of 3HV monomers (21 tool%) and were named PHBV-H (produced by H. arnylolyticum) and PHBV-B (produced by R. eutropha) based on their source. Interestingly, they exhibited different behaviors especially in thermal stabil- ity, melting temperature, crystallinity percentage, and mechanical properties. Furthermore, the films of PHBV-Hand PHBV-B possessed different surface properties, such as surface roughness, wettability, and surface free energy. The value of hemolysis on the PHBV-H film was lower in comparison with the PHBV-B film, although both values were within the limit of 5 % permissible for biomaterials. Notably, few inactivated platelets adhered to the surface of the PHBV-H film, whereas numerous activated platelets were seen on film PHBV-B. These results indicated that PHBV-H was a better potential component of blood-contact biomaterials than PHBV-B. Our study clearly revealed that the properties of PHAs are source dependent and haloarchaeal species provide a new opportunity for the production of desired PHAs.
Youxi ZhaoZhiming RaoYanfen XuePing GongYizhi JiYanhe Ma
关键词:POLYHYDROXYALKANOATESWETTABILITY
谷氨酰胺酶基因的克隆、表达和酶学性质研究被引量:2
2019年
以枯草芽孢杆菌基因组为模板通过PCR扩增获得谷氨酰胺酶基因ylaM,构建重组质粒pMA5-ylaM,将其转化到枯草芽孢杆菌168中获得重组菌BS168/pMA5-ylaM,并在宿主菌成功得到表达,纯化后的谷氨酰胺酶比酶活大小为939.48 U/mg。谷氨酰胺酶的反应最适pH为7.5,反应最适温度为55℃,La^3+、Zn^2+、Fe^3+和Al^3+对谷氨酰胺酶活力具有一定的抑制作用,在NaCl浓度为15%~17.5%的条件下,该酶酶活力可以保留50%以上。在5 L罐中,通过分批补料发酵,其最高酶活力产量为215.06 U/mL。
张美丹饶志明张显杨套伟徐美娟
关键词:枯草芽孢杆菌谷氨酰胺酶酶学性质
共1页<1>
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