山东省高等学校科技计划项目(J12LK56)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
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- 重组BCG的抑瘤活性及免疫学机制研究被引量：3
- 2015年
- 目的:对重组GM-CSF和EB病毒LMP2A融合基因的BCG(卡介苗)进行抑瘤活性及免疫学机制研究。方法:建立EB病毒阳性肿瘤动物模型,对小鼠成瘤时间、存活情况、肿瘤重量进行分析,检测重组BCG的抑瘤活性;用ELISA方法对重组BCG刺激机体产生的特异性抗体进行检测,乳酸脱氢酶法检测特异性CTL杀伤效应,ELISPOT法检测IFN-γ的分泌水平,流式细胞术、HE染色检测重组BCG免疫小鼠的肿瘤组织中的淋巴细胞浸润情况。用统计学方法对重组BCG免疫效果进行初步分析和评价。结果:肿瘤成瘤时间与其他对照相比明显延迟,肿瘤生长明显缓慢,小鼠生存期延长。ELISA检测结果表明,重组BCG免疫后能产生针对GM-CSF和LMP2A的特异性Ig G抗体,重组BCG免疫组的小鼠能检测到特异性CTL活性,用ELISPOT法检测到免疫小鼠淋巴细胞有IFN-γ分泌;流式细胞术及形态学观察的方法检测到重组BCG免疫的小鼠肿瘤组织中有淋巴细胞的浸润生长。结论:重组BCG诱导C57BL/6小鼠机体产生了体液免疫和细胞免疫反应,重组BCG对EB病毒阳性肿瘤细胞具有明显抑制作用。
- 薛庆节李秀真李运清杨媛媛胡文洁章洪华吕厚东李士根
- 关键词：重组BCG抗肿瘤细胞免疫EB病毒
- 卡介苗抗肿瘤治疗研究进展
- 2012年
- 卡介苗（BacillusCalmette-Guerin，BCG）是用牛型结核分枝杆菌培育而成的减毒活疫苗，广泛用于结核病预防。近年来研究发现，BCG具有抗肿瘤活性，可作为膀胱癌、黑素瘤、肺癌、肾癌等恶性肿瘤的治疗制剂。此文就BCG抗肿唐治疗的作用机制和应用作一综述。
- 薛庆节吕厚东陈廷
- 关键词：卡介苗肿瘤免疫疗法抗肿瘤药
- EB病毒与肿瘤的相关分子机制研究被引量：7
- 2015年
- EB病毒与人类多种肿瘤的发生相关,其发生的分子机制十分复杂。本文就EB病毒与肿瘤形成的相关机制进行论述,重点讨论EB病毒潜伏期和裂解期基因表达产物的主要功能及其在肿瘤形成中的作用及相关的分子机制。
- 聂尚丹
- 关键词：EB病毒肿瘤病毒基因表达分子机制
- GM-CSF与LMP2A融合基因重组卡介苗的免疫学特性被引量：6
- 2014年
- 目的对融合的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（ gramulocyte-macrophase colony-stimu-latingfactor， GM-CSF）基因与EB病毒（Epstein-Barr virus）基因LMP2A进行鉴定并对rBCG进行免疫学特性研究。方法用免疫印迹法（ Western blot ）检测rBCG中融合基因表达；将表达融合基因的rBCG注射小鼠，用酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测血清特异性抗体表达水平，乳酸脱氢酶法检测细胞免疫功能，观察rBCG的作用；建立小鼠EBV阳性的肿瘤模型并观察rBCG的治疗效果。结果 rBCG能分泌性表达目的蛋白，该目的蛋白能被GM-CSF抗体及LMP2 A抗体识别；ELISA结果显示rBCG能刺激小鼠产生相应抗体，注射小鼠的细菌数量为5×10^8个时，抗体最大滴度为1∶27900[（326．5±7．8） pg/ml]；rBCG组对EBV阳性胃癌细胞（GT39细胞）的杀伤率为（89．6±6．8）％，显著大于对照组（P＜0．05）。 PBS及BCG对照组的肿瘤体积明显大于rBCG治疗组，3组肿瘤体积分别为（1964．0±548．7） mm3、（1268．7±72．4） mm3、（168．6±78．8） mm3。结论 GM-CSF与LMP2A融合基因重组卡介苗成功表达目的蛋白，免疫小鼠后产生体液免疫和细胞免疫；rBCG能有效抑制小鼠体内的肿瘤生长。
- 陈廷王晖吕厚东司传平薛庆节
- 关键词：GM-CSFLMP2A重组卡介苗细胞毒性T淋巴细胞
- GM-CSF与BZLF1融合基因重组BCG抗肿瘤研究被引量：2
- 2015年
- 目的对已融合的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(GM-CSF)与EB病毒即刻早期基因(BZLF1)进行抗肿瘤活性及免疫学研究。方法建立C57BL/6小鼠肿瘤模型,rBCG注射免疫后采用ELISA检测其特异性抗体,用乳酸脱氢酶法检测特异性CTL,HE染色检测肿瘤组织中的淋巴细胞浸润情况。并对各试验组小鼠成瘤时间、肿瘤大小进行分析,采用t检验方法对重组BCG抗肿瘤效果进行初步分析和评价。结果 rBCG免疫小鼠肿瘤成瘤时间延迟,最迟长达11.9d;肿瘤生长缓慢,生存时间显著延长,平均抑瘤率为82%;rBCG刺激小鼠产生特异性GM-CSF和BZLF1抗体,特异性CTL活性增强;当效靶比(E/T)为40∶1时,CTL杀伤率为(37.25士5.09)%;HE染色镜检肿瘤组织中淋巴细胞浸润。结论重组BCG免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫和细胞免疫,可抑制EB病毒阳性肿瘤细胞生长。
- 薛庆节杨春青胡文洁吕厚东陈廷司传平李士根
- 关键词：即刻早期基因重组卡介苗抗肿瘤
- GM-CSF与BZLF1融合基因修饰的重组BCG的构建与表达被引量：3
- 2014年
- 目的将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(GM-CSF)与EB病毒即刻早期基因(BZLF1)重组为融合基因GCBF,并转化入卡介苗(BCG)中进行表达。方法用随机引物Oligo(d T)15进行RT-PCR,分别获得人GM-CSF和BZLF1编码序列的c DNA。将纯化GM-CSF和BZLF1 PCR扩增产物插入分泌表达载体p MV261,并转化入感受态细胞Escherichia coli DH5α(E.coli DH5α),在LB培养基上进行卡那霉素抗性选择,测序正确的序列进行剪接式重叠延伸,将目的基因GM-CSF和BZLF1编码经多肽接头(Gly4Ser)3序列连接,构建融合基因GCBF,将GCBF克隆至p MV261,转化感受态细胞E.coli DH5α,在LB培养基平板上进行卡那霉素抗性选择,阳性克隆提取质粒后转化感受态BCG,western-blot检测GCBF在r BCG中的表达。结果目的基因GM-CSF和BZLF1 RT-PCR产物大小分别为461 bp和788bp,与预期值一致。构建的重组质粒经双酶切、扩增及测序鉴定证实,融合基因GCBF(1209bp)正确插入载体,成功转化入BCG感受态细胞,且被正确表达。结论融合基因GCBF修饰的r BCG构建及表达成功,为进一步探讨r BCG杀伤EB病毒阳性肿瘤的免疫活性研究奠定了实验基础。
- 薛庆节杨媛媛胡文洁吕厚东李士根陈廷
- 关键词：基因重组重组卡介苗
