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广东省科技计划工业攻关项目(2008A030201012)
作品数:
3
被引量:7
H指数:2
相关作者:
林刁珠
雷娟
薛声能
严励
杨川
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相关机构:
中山大学孙逸仙纪念医院
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广东省科技计划工业攻关项目
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基质金属蛋白酶9高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响
被引量:4
2012年
目的观察基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9,MMP9)高表达对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,以阐述其在糖尿病足伤口愈合中的可能机制。方法本研究在中山大学孙逸仙纪念医院内分泌专科实验室完成。大鼠皮肤成纤维细胞与高糖(22mmol/L)+高同型半胱氨酸(100μmol/L)联合孵育建立体外MMP9高表达细胞模型,另设正糖(5.5mm0l/L)孵育对照组。RealtimePCR、ELISA和明胶酶谱法检测MMP9mRNA、蛋白表达量及活性,流式细胞仪检测细胞增殖功能,CCK-8检测细胞活力,ELISA法检测细胞胶原(羟脯氨酸)分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Tmnswell法评价细胞纵向迁移能力。计量数据以均数±标准差(X^—±s)表示,两组间均数的比较采用成组t检验,以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果与对照组比较,MMP9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞的MMP9mRNA、蛋白表达量及活性,分别升高6.05倍、4.12倍和1.58倍(P〈0.01);与此同时MMP9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例、增殖指数、细胞活力、胶原(羟脯氨酸)分泌量、6h横向迁移率和纵向迁移细胞数,分别下降29.8%、18.1%、23.3%、68.7%、45.0%和21.4%(P〈0.01)。结论MMP9高表达的皮肤成纤维细胞增殖减慢、活力下降、迁移和胶原分泌能力降低,提示MMP9可能抑制成纤维细胞的生物学行为。
薛声能
杨川
林刁珠
严励
雷娟
关键词:
基质金属蛋白酶9
成纤维细胞
生物学行为
细胞活力
糖尿病足
外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1对基质金属蛋白酶-9高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响
被引量:1
2012年
目的观察外源性组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)高表达大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响,为寻找治疗糖尿病足的新方法提供实验依据。方法应用sD大鼠皮肤成纤维细胞株CRL-1213用高糖(22mmol/L)+高同型半胱氨酸(100μmol/L)联合培养建立体外MMP-9高表达皮肤成纤维细胞模型,用外源性TIMP-1(100μg/iJ)抑制MMP-9的活性,采用实时PCR法和ELISA法检测MMP.9基因及蛋白表达量,用明胶酶谱法检测MMP-9蛋白活性,采用流式细胞术检测细胞增殖功能、CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测细胞胶原(羟脯氨酸)分泌能力、划痕实验评价细胞横向迁移能力、Transwell法评价细胞纵向迁移能力。采用单因素方差分析进行统计学分析。结果TIMP-1干预组大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达量与MMP-9高表达组比较差异无统计学意义(P〉0.05),但MMP-9蛋白活性受到明显抑制(1.47±0.13VS0.434-0.13,t=12.495,P〈0.01)。与对照组比较,MMP-9高表达组大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[(9.31±0.24)%VS(6.54±0.29)%]、增殖指数[(13.8±0.5)%VS(11.3±0.6)%]、细胞活力(1.76±0.13V81.35±0.12)、胶原(羟脯氨酸)分泌量[(1126-1-63)vs(353±61)μg/L]、6h横向迁移率[(38.7±2.6)%VS(21.3±2.1)%]和纵向迁移细胞数(91±4vs71±4)均明显减少(t=16.433、7.328、5.113、19.847、11.529、8.124,均P〈0.05);TIMP-1干预后,大鼠皮肤成纤维细胞S期的比例[(6.54±0.29)%VS(7.75±0.27)%]、增殖指数[(11.3±0.6)%vs(12.5±0.5)%]、细胞活力(1.35±0.12VS1.64±0.14)、胶原(羟脯氨酸)分泌量[(3534-61)vs(829±59)仙g/L]、6h横向迁移率[(21.3±2.1)%VS(31.5±2.7)%]和纵向迁移细胞数(71±4vs85±4)与MMP
薛声能
雷娟
杨川
林刁珠
朱平
徐明彤
严励
关键词:
基质金属蛋白酶9
组织金属蛋白酶抑制剂1
高分泌MMP9皮肤成纤维细胞模型的建立
被引量:2
2011年
目的:建立高分泌基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的皮肤成纤维细胞模型,为探讨MMP9在糖尿病足伤口愈合中的作用提供细胞模型。方法:用不同浓度的糖和同型半胱氨酸培养皮肤成纤维细胞,检测各组细胞MMP9 mRNA及蛋白表达水平和活性,筛选出MMP9表达量最高的组。结果:(1)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9mRNA表达量(7.05±1.02)显著高于正糖组和高糖组(P均<0.01);(2)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9蛋白表达量(206.9±33.6)pg/ml明显高于正糖组和高糖组(P均<0.01);(3)高糖+高同型半胱氨酸组MMP9蛋白活性(1.47±0.13)高于正糖组和高糖组(P均<0.01)。结论:高糖+高同型半胱氨酸联合培养成功建立体外高分泌MMP9皮肤成纤维细胞模型。
薛声能
雷娟
林刁珠
朱平
严励
关键词:
基质金属蛋白酶-9
成纤维细胞
糖尿病
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