国家自然科学基金(81261160323)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：黄曦刘超张萍张佩芬夏君更多>>
- 相关机构：中山医学院广州市疾病预防控制中心中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恙虫东方体环介导恒温扩增技术检测方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的利用环介导恒温扩增技术(LAMP)建立一种简便、快速、有效的恙虫东方体检测方法。方法利用LAMP DESIGNER软件设计恙虫东方体TSA56基因通用检测引物,建立恙虫东方体LAMP检测方法。并与Realtime PCR和普通PCR方法进行检测特异性和灵敏度的比较。同时,对16例临床确诊的恙虫东方体感染病例以及20例健康人样本进行检出率的比较。结果本研究设计的恙虫东方体检测引物与其他病原体无交叉反应,所建立的恙虫东方体LAMP方法的检测灵敏度与Real-time PCR一致,为1.0×102 copies/μl,是普通PCR方法灵敏度(1.0×103copies/μl)的10倍。16例临床确诊恙虫东方体感染病例血液样本或焦痂样本的检测,LAMP方法阳性检出数与Real-time PCR一致(16/16),检出率为100%,高于普通PCR方法(62.5%,10/16)。三种方法检测健康人样本均为阴性。结论本研究成功建立了一种简便、特异、灵敏的恙虫东方体LAMP检测方法,为临床恙虫东方体的诊断提供了新方法。
- 刘泽霞胡胜锋田国宝景钦隆黄曦
- 登革病毒非结构蛋白NS4A的克隆表达及与其相互作用蛋白质的亲和纯化被引量：2
- 2013年
- 目的克隆表达登革病毒非结构蛋白NS4A，分离纯化与其相互作用的细胞蛋白。方法用特异性引物PCR扩增出FLAG—NS4A-HA基因片段，克隆至真核表达载体pSG5中，将重组质粒通过脂质体法瞬时转染入A549细胞，并通过Western blot检测NS4A融合蛋白的表达情况。利用串联亲和纯化系统（TAP）纯化分离与NS4A相互作用的蛋白，Western blot技术及银染SDS．PAGE验证NS4A蛋白复合物的纯化和分离情况。结果成功构建NS4A蛋白融合表达载体和FLAG、HA串联亲和纯化系统，SDS·PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了NS4A蛋白带和2条可能与NS4A相互作用的蛋白质片段。结论成功分离纯化与NS4A相互作用的细胞蛋白，为进一步研究机体抗登革病毒感染的机制奠定了基础。
- 夏君谢炯张佩芬李玉叶刘超黄曦张萍
- 关键词：登革病毒NS4A串联亲和纯化相互作用
