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抗猪SIgA单克隆抗体的研制被引量：10: 2005年; 采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术,从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,第1次融合率为79.7%,第2次融合率为60.3%。建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体,初检阳性率分别为4.1%、16.8%。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实,所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,CA6分泌抗体属IgM、κ型,而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。; 吴胜昔姜平李玉峰; 关键词：单克隆抗体

猪繁殖与呼吸综合征病毒R98弱毒株的分离鉴定与ORFs3～7基因特性研究被引量：6: 2008年; 从江苏某种猪场自北美引进的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体阳性临床健康仔猪血清中分离到1株病毒,经生物学特性测定、血清学试验、分子生物学鉴定、电镜观察及猪体致病性试验,鉴定为美洲型PRRSV类弱毒株。应用RT-PCR技术对该分离株ORFs3～7结构蛋白基因进行扩增、克隆与cDNA序列分析,结果表明该分离毒株的ORFs3～7基因序列与PRRSV-MLV弱毒株的相应基因同源性均达99.0%以上,属美洲型毒株。; 李玉峰姜平蔡宝祥简中友; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征弱毒株结构蛋白

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定被引量：93: 2004年; 在通过对上海一发病猪群临床流行病学研究和病理学观察的基础上 ,从发病仔猪肺脏、气管和脾脏检出并分离到 1株革兰氏阴性细小杆菌 ,兼性厌氧。生化试验为 :接触酶阳性 ,氧化酶阴性 ,鸟氨酸脱羧酶、吲哚和脲酶阴性 ;生长需要NAD ,发酵果糖、半乳糖、葡萄糖和蔗糖 ;不分解D 甘露醇、D 山梨醇和海藻糖。用副猪嗜血杆菌的 1 6S小亚单位rRNA和tbpA基因的特异性PCR引物 ,通过PCR技术分别从该分离菌株扩增出 82 2bp及 1 9kb的特异基因片段。; 尹秀凤姜平邓雨修汤景元; 关键词：副猪嗜血杆菌

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性测定被引量：17: 2006年; 应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株S1毒株的GP5基因序列,然后通过KpnI和XhoI酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。重组穿梭载体经过酶切和PCR鉴定后进行测序,证明所克隆入的基因以正确的阅读框插入。获得的重组穿梭载体经线性化后与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183菌株。纯化的重组腺病毒质粒经酶切线性化后转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒经纯化后进行RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,证明了用PRRSVGP5蛋白基因所构建的重组腺病毒成功的表达了GP5蛋白。猪体免疫试验后收集血清进行中和实验证明所构建的重组腺病毒在猪体内能够诱导产生中和抗体,因此我们所构建的重组腺病毒可以作为PRRSV基因工程疫苗研究候选病毒株。; 李玉峰姜平蒋文明汤景元; 关键词：PRRSV GP5 重组腺病毒

猪繁殖与呼吸综合征病毒和致病性沙门氏菌的混合感染被引量：16: 2005年; 2003年9～11月某猪场发生母猪持续性繁殖障碍和7日龄仔猪呼吸困难、寒颤、下痢、体温升高和实质性器官出血为主要特征的疾病.3头发病仔猪的病变组织用RT-PCR检测,均为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性;由3头发病猪病料中所分离的细菌,可于普通琼脂、伊红美蓝和麦康凯琼脂培养基上生长,革兰氏染色阴性,形态与组织触片镜检及生化反应特性与沙门氏菌一致,可致死小鼠,仅对头孢唑啉呈中度敏感.结合该病的流行病学调查、临床症状、病理剖检,确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和致病性沙门氏菌混合感染.; 汤景元姜平邓雨修李玉峰; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征致病性沙门氏菌

猪繁殖与呼吸综合征病毒华东地区分离株RT-PCR-RFLP分析被引量：17: 2004年; Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates identified in samples from 50 field cases originated from eastern China herds were studied. ORF5 gene of PRRSV isolates was amplified by reverse transcript polymerase chain reaction(RT-PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns for enzymes MluⅠ, HincⅡand SacⅡwere determined on these ORF5 genes. The RFLP pattern obtained from 39 isolates was 2-2-1(78%), 3 isolates was 1-1-1(6%) and 8 isolates identified in 2003 was 1-3-1 (16%). The results showed PRRSV strains have variations and existed no less than 3 gene subtypes in the area.; 邓雨修姜平李玉峰王先炜蒋文明汤景元; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒限制性片段长度多态性 PRRSV 抗原性毒力

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建与鉴定被引量：16: 2006年; 猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap),其中Cap含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。本研究利用PCR技术将Cap蛋白基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-Cap,测定其TCID50为1013.7/mL。用RT-PCR、间接ELISA、Westernblot和IPMA等方法证明了Cap蛋白在腺病毒中获得表达。该研究为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。; 王先炜姜平李玉峰蒋文明汤景元; 关键词：CAP蛋白腺病毒

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江苏省高校高新技术产业发展项目(BG2002317)