国家自然科学基金(81273786)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：马红霞叶丹凤郑艳华刘华马婉莹更多>>
- 相关机构：广州医科大学广州医学院第一附属医院广东药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中山市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 养精种玉颗粒的定性定量方法研究被引量：3
- 2013年
- 目的:建立养精种玉颗粒的定性定量方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中的白芍、当归、山茱萸进行鉴别;采用HPLC法测定芍药苷的含量。结果:薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;芍药苷进样量在60.56～605.6 ng与峰面积的线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率99.2%(RSD 1.5%)。结论:建立的方法简便、准确、重复性好,可用于该制剂的质量控制。
- 王婴张婧王岩马红霞
- 关键词：芍药苷
- 重组质粒pGMLV-SC1 RNAi的构建及其对猪卵巢颗粒细胞c-Fos的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建慢病毒载体及观察其介导的RNA干扰猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因表达情况。方法通过在线软件设计猪c-Fos基因shRNA序列,合成、退火形成双寡链核酸后克隆到PGMLV-SC1载体,测序。用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染293T细胞,包装成4组病毒(shRNA c-Fos1、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos4),并测定滴度。感染猪卵巢颗粒细胞,采用PCR和Western blot检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达。结果重组克隆中插入片段序列与设计的Oligo序列完全一致。滴度为1×108TU/mL,感染复数30时,阴性对照组、实验shRNA c-Fos4、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos1组c-Fos mRNA的表达分别为对照组的0.842 7±0.065 6、0.797 6±0.073 8、0.694 1±0.048 9、0.653 7±0.047 0、0.312 3±0.010 6倍(P<0.05),c-Fos蛋白的表达下降。结论实验shRNA c-Fos1组c-Fos基因下调最明显,成功构建猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因慢病毒RNAi表达载体并筛选出最佳siRNA序列。为c-Fos基因的功能研究提供了研究基础。
- 叶丹凤郑艳华丁涛薛士鹏马红霞
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- MAPK信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制被引量：4
- 2015年
- 目的通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路探讨养精种玉汤正丁醇(ZDC)及乙酸乙酯(YSYZ)提取物降低猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制。方法分离并培养猪卵巢颗粒细胞,将细胞按不同浓度的MAPK抑制剂PD98059孵育,分为0(空白对照)、1、3、10、25μmol/L共5组,培养24 h后,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测17α-羟化酶/C17,20-裂解酶(cytochrome P450c17a,CYP17)mRNA表达水平,应用放射免疫测定法(RIA)检测细胞上清液雄激素(睾酮)含量,筛选最佳的PD98059作用浓度;采用10μmol/L PD98059干预卵巢颗粒细胞24 h后,将细胞培养液更换成含或不含有不同浓度(0、1、5、25、50 mg/m L)的养精种玉汤有效成分提取物ZDC及YSYZ干预不同的时间(3、6、18、24 h)后,采用Western blot法检测各组磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、c-Fos及CYP17蛋白表达水平,RIA法检测细胞上清液睾酮含量。结果 10μmol/L PD98059可明显降低猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加CYP17 mRNA表达,并可增加细胞上清液睾酮含量(P<0.05)。当养精种玉汤ZDC、YSYZ提取物浓度为25 ng/m L、作用时间为6 h时,可增加猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2、c-Fos蛋白水平并降低CYP17蛋白的表达,降低细胞上清液睾酮含量(P<0.05)。结论养精种玉汤有效成分通过增加MAPK的活性从而降低猪卵巢颗粒细胞的雄激素生成。
- 叶丹凤马红霞吴婉婷赖毛华刘华郑艳华马婉莹
- 关键词：养精种玉汤雄激素丝裂原活化蛋白激酶
