目的探讨体外诱导负载TGF-β1基因的兔关节滑膜细胞向透明软骨细胞分化的可行性，为组织工程学修复关节软骨损伤提供体外实验依据。方法体外培养扩增B型滑膜细胞并纯化，构建pcDNA3．1-TGF-β1，用Lipofectamine 2000法转染，转染pcDNA3．1-TGF-β1组为实验组，转染pcDNA3．1（＋）空质粒组为对照组，未转染组为空白组。转染后48h行G418筛选，RT—PCR检测TGF-β1的瞬时表达，同时取阳性细胞爬片，行抗TGF-β1免疫组织化学染色；G418维持筛选，每2d取部分细胞计数，连续12d，绘制生长曲线，转染后3周，每周取部分细胞爬片行抗TGF-β1和抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。图像分析采用Image—Pro Plus V6．0软件分析处理，实验数据采用SPSS 13．0行统计学处理，组间两两比较采用方差分析。结果实验组转染后转染率为18％，转染后生长曲线显示细胞早期生长活性下降，细胞数量在转染后第4天降低到3．6×10^4／ml，第3天RT—PCR检测到TGF-β1阳性片段，抗TGF-β1免疫组织化学染色见细胞内阳性颗粒，对照组及空白组均为阴性；细胞转染后第3周，实验组抗TGF-β1及抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色仍见细胞内阳性颗粒，对照组及空白组为阴性；图像分析结果表明，转染后第7天实验组抗TGF-β1的PU值为（19．04±1．26），对照组及空白组PU值分别为（4．07±0．65）和（3．23±0．56），差异有统计学意义（P〈0．05）；转染后14d实验组抗Ⅱ型胶原的PU值为（13．74±1．27），对照组及空白组PU值分别为（4．62±0．56）和（3．93±0．38），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论脂质体法重组pcDNA3．1-TGF-β1基因可成功转染兔关节滑膜细胞，转染后细胞成功表达TGF-β1，并分泌Ⅱ型胶原蛋白，表现出透明软骨细胞样生理特征，滑膜细胞有望成为一种良好的软骨组织工程的种子细胞。
