卫生部科学研究基金(WKJ2011-2-018)
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：绍兴市人民医院温州医学院温州医科大学更多>>
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- 黄酒对同型半胱氨酸诱导的大鼠血管内皮细胞基质金属蛋白酶2表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:观察黄酒和红葡萄酒是否能抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管内皮细胞(VECs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。方法:大鼠原代主动脉VECs经分离培养及纯化鉴定后,取第3～4代细胞用于实验。将Hcy(0、50、100、500、1 000μmol/L)与VECs共同孵育48 h及100μmol/L Hcy与VECs共同培养24、48、72 h,分别用免疫印迹和明胶酶谱法检测Hcy对MMP-2蛋白表达和活性的影响,确定Hcy最佳干预的浓度和时间。每种酒(1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2.0%)与100μmol/L Hcy共同孵育VECs 48 h,MTT法检测酒类对细胞活性的影响,确定最佳干预浓度后处理分control组、Hcy组、Hcy+黄酒组、Hcy+红酒组和Hcy+酒精组5组。培养48 h后收集样品,免疫印迹法检测VECs中MMP-2的表达量,明胶酶谱法测定VECs上清液中MMP-2的活性。结果:Hcy在50～500μmol/L呈浓度依赖性地促进MMP-2蛋白表达和活性的增强(P<0.05或P<0.01),Hcy在100μmol/L时干预24、48、72 h MMP-2蛋白表达和活性的增强呈时间依赖性,48 h时最明显(P<0.01)。与Hcy组相比,黄酒组和红酒组VECs MMP-2蛋白表达及上清液中MMP-2活性显著下降(P<0.05),酒精组MMP-2蛋白表达及上清液中MMP-2活性下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。与酒精组相比,黄酒组和红酒组VECs MMP-2表达及上清液中MMP-2活性的差异有统计学意义(P<0.05),黄酒组和红酒组之间无显著差异(P>0.05)。结论:Hcy能增强血管内皮细胞MMP-2蛋白表达及酶的活性,小剂量的黄酒和红葡萄酒均能抑制Hcy诱导的MMP-2表达及活化。
- 季政郭航远池菊芳翟小亚刘龙斌孙荷彭放
- 关键词：黄酒内皮细胞基质金属蛋白酶2同型半胱氨酸
- 黄酒多酚对LDLR^(-/-)小鼠MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达和动脉粥样硬化斑块的影响被引量：14
- 2013年
- 目的观察黄酒是否可以通过黄酒多酚发挥对动脉粥样硬化斑块的抑制作用并探讨其可能机制。方法40只6周龄雄性低密度脂蛋白受体敲除(LDLR-/-)小鼠,高脂饲料喂养诱导形成动脉粥样硬化模型,随机分为高脂对照组、瑞舒伐他汀组、黄酒多酚10 mg/(kg·d)组、黄酒多酚30 mg/(kg·d)组和黄酒多酚50 mg/(kg·d)组,每组8只,分别予以无菌水、10 mg/(kg·d)瑞舒伐他汀和10、30、50 mg/(kg·d)黄酒多酚干预。16周后处死小鼠,检测血脂,观察胸腹主动脉粥样硬化情况,Western blot测定胸主动脉组织内基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达,明胶酶谱法测定主动脉弓动脉粥样硬化处MMP-2和MMP-9的活性。结果与高脂对照组相比,总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)在黄酒多酚组和瑞舒伐他汀组明显下降(P<0.01),甘油三酯(TG)在瑞舒伐他汀组明显下降(P<0.01),在黄酒多酚组差异不明显(P>0.05),在黄酒多酚组与瑞舒伐他汀组差异明显(P<0.05);5组间高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平差异无统计学意义(P>0.05)。与高脂对照组相比,主动脉粥样硬化面积在瑞舒伐他汀组和黄酒多酚10、30、50 mg/(kg·d)组分别减少74.14%、18.51%、40.09%、38.42%(P<0.01),不同浓度黄酒多酚组主动脉粥样硬化面积与瑞舒伐他汀组比较差异显著(P<0.01)。黄酒多酚和瑞舒伐他汀均能明显抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性(P<0.01),增强TIMP-1、TIMP-2的表达(P<0.01)。结论黄酒多酚具有类似瑞舒伐他汀的作用,能够调节血脂,在抑制MMP-2、MMP-9表达和活性的同时增强TIMP-1、TIMP-2的表达,减轻动脉粥样硬化斑块的形成,这可能是黄酒对心血管系统的保护机制之一。
- 翟小亚郭航远池菊芳季政唐伟良赵飞蒋承建
- 关键词：动脉粥样硬化基质金属蛋白酶2
- 同型半胱氨酸对大鼠血管内皮细胞MMP-2表达的影响和黄酒、红葡萄酒的逆转效应及其机制被引量：3
- 2013年
- 目的观察黄酒能否抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达及探讨其可能机制。方法大鼠原代主动脉VECs经分离培养及纯化鉴定后,取第3～4代细胞用于实验。将Hcy(0、50、100、500、1 000μmol/L)与VECs共同孵育48h及100μmol/L Hcy与VECs共同培养24、48、72h,分别用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫印迹法检测Hcy对VECs中MMP-2mRNA和蛋白表达的影响,确定Hcy最佳的刺激浓度和时间。每种酒(10、12、14、16、18、20mL/L)与100μmol/L Hcy共同孵育VECs 48h,MTT法检测酒类对细胞活性的影响,确定最佳干预浓度后处理分为正常组、Hcy组、Hcy+黄酒组、Hcy+红葡萄酒组、Hcy+酒精组5组。培养48h后收集样品,FQ-PCR检测VECs中MMP-2mRNA水平,免疫印迹法测定VECs中MMP-2的表达量。结果在50～1 000μmol/L浓度范围内与对照组相比Hcy能明显地增强MMP-2 mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),至500μmol/L时开始达到最高。Hcy(100μmol/L)刺激24、48、72h后MMP-2mRNA和蛋白表达较对照组有明显的增强(均P<0.01),48h后开始达到最大值。实验组与Hcy组相比,黄酒组和红酒组MMP-2mRNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(均P<0.01)。酒精组MMP-2mRNA和蛋白表达下降,差异均无统计学意义(P>0.05)。与酒精组相比,黄酒组和红酒组VECs中MMP-2mRNA和蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(均P<0.01),黄酒组和红酒组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hcy能增强VECs中MMP-2mRNA和蛋白的表达,这可能在动脉粥样硬化的发病机制中发挥重要作用。黄酒和红葡萄酒能抑制Hcy对MMP-2mRNA和蛋白表达的增强,这可能是它们抗动脉粥样硬化和心血管保护作用的机制之一。
- 季政郭航远池菊芳刘龙斌唐伟良许富康翟小亚孙荷茹翱
- 关键词：黄酒红葡萄酒内皮细胞同型半胱氨酸
- 一种大鼠主动脉内皮细胞分离培养的改良方法被引量：4
- 2012年
- 目的探索一套原代培养大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)简单实用的方法体系。方法 SD大鼠两只,无菌环境下分离胸腹主动脉,清除脂肪、结缔组织。显微剪剪开主动脉,内膜面向下贴附于少量Ⅰ型胶原酶上消化60min。离心收集内皮细胞置于1%明胶包被的六孔板,加入20%胎牛血清的M199中培养。3～4天后换液更换内皮细胞培养基(ECM)培养。当细胞长满约90%底面积时,玻璃探针机械剔除成纤维样细胞后传代。倒置显微镜和抗Ⅷ因子抗体对细胞分别做形态学和免疫细胞化学鉴定。结果原代培养3～4天时,少量细胞开始贴壁并分裂生长。更换ECM后细胞增殖迅速,培养8～10天时可见细胞长满90%左右的底面积,呈典型的"铺路石"或"鹅卵石"征。免疫细胞化学鉴定表明在分离培养的内皮细胞中有特定Ⅷ因子表达。原代周期8～10天,传代周期3～4天,经纯化传代后纯度接近100%。传至第6代仍未见细胞分裂增殖活性下降。结论本实验体系培养RAEC简单有效,重复性良好。获得细胞数量多、纯度高,有利于实验人员掌握。
- 季政郭航远池菊芳刘龙斌彭放
- 关键词：主动脉内皮细胞原代培养
