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模式抗原Mannan-TTC的制备及免疫原性分析: 2013年; 目的:制备高免疫原性的模式抗原Mannan-TTC,分析其免疫原性。方法:将甘露聚糖(Mannan)与破伤风毒素C片段(TTC)蛋白进行化学交联,SDS-PAGE分析交联产物。用混合淋巴细胞反应检测DC负载Mannan-TTC刺激同种异体T细胞增殖的能力;WST-1和ELISA检测TTC特异性CD4+T细胞的增殖和分泌IFN-γ的能力;小鼠免疫后,用ELISA检测TTC特异性抗体水平。结果:成功交联Mannan与TTC,获得模式抗原Mannan-TTC。该交联产物能通过活化树突状细胞(DC),不仅增强了对同种异体T细胞增殖的能力,而且显著增强TTC抗原特异性的CD4+T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子IFN-γ。动物免疫实验则显示,该交联产物能刺激小鼠免疫细胞产生TTC抗原特异性的抗体,但与单纯TTC抗原刺激相比,无显著性差异。结论:所获Mannan-TTC抗原免疫原性好,能显著增强细胞免疫应答,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原。; 王凡平王明永赵东方马淑君余文发杜继英丁肖华朱琳琳谭静赵永新毛光兰申家辉; 关键词：甘露聚糖免疫原性

甘露聚糖结合凝集素诱导DC成熟机制分析被引量：6: 2012年; 目的:探讨甘露聚糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)诱导人外周血单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)成熟的机制。方法:从健康成人外周血分离Mo,常规方法体外诱导未成熟DC(imDC),FACS分析DC成熟过程中MBL对CD分子表达的影响,进一步分析MBL与imDC的结合情况;RT-PCR分析DC表面模式识别分子Toll样受体-2(TLR2)和Toll样受体-4(TLR4)的表达;凝胶电泳迁移率法(EMSA)和Western blot分析NF-κB的活性及细胞核移位。结果:FCM分析表明,MBL能够使DC表面CD83、CD86及MHC分子表达升高;MBL能够以Ca2+浓度依赖关系与imDC细胞结合;RT-PCR结果表明MBL能够减少DC表面TLR2和TLR4的表达。EMSA和Western blot分析结果显示,MBL能够增强NF-κB活性及细胞核移位。结论:MBL可通过直接结合imDC表面分子来影响DC模式识别分子的表达并调节信号分子NF-κB活性,提示MBL能够通过配体结合调控DC分化成熟,揭示了MBL调节DC分化成熟有关信号途径。; 王凡平王明永杨建斌赵东方王红坡邵峰孙瑞利郭庆合凌明智赵永新宋士军郭继强; 关键词：甘露聚糖结合凝集素树突状细胞 TOLL样受体 NF-ΚB 免疫调节

幽门螺杆菌热休克蛋白A核酸疫苗的构建: 2013年; 目的构建幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)亚单位核酸疫苗,为进一步研制Hp核酸多价疫苗提供技术平台。方法以PMD-HspA为模板,扩增、纯化Hp hspA基因,插入到真核表达载体PcDNA3中,转化大肠埃希菌DH5a,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,得到重组核酸疫苗pcDNA3-HspA,用特异性PCR方法和小提质粒酶切电泳鉴定重组质粒,同时将pcDNA3-HspA进行测序,进一步确定是否构建成功及鉴定构建过程中是否发生基因突变。结果 PCR鉴定结果显示,扩增产物为0.36kb的目的基因;酶切鉴定结果显示,得到5.45kb克隆载体片段和0.36kb的目的基因片段;重组质粒pcDNA3-HspA测序,得到基因全长357bp目的基因片段,与克隆质粒测序图比较,无基因变异。结论成功构建了Hp单价核酸疫苗pcDNA3-HspA,为研制Hp核酸多价疫苗奠定基础。; 王凡平王明永杨建斌赵东方孙瑞利余文发郭庆合马淑君朱琳琳赵永新谭静; 关键词：幽门螺杆菌核酸疫苗

MBL抑制LPS诱导DC成熟机制的研究被引量：8: 2013年; 本研究探讨甘露聚糖结合凝集素(MBL)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人外周血单核细胞来源树突状细胞(DC)成熟的机制。从健康成人外周血分离单核细胞(Mo),用常规方法体外诱导未成熟DC(imDC),FACS分析MBL与imDC的结合,并进一步分析MBL对LPS结合imDC的影响;ELISA和Western blot分析MBL与可溶性的TLR4胞外段蛋白(sTLR4)结合;Western blot分析NF-κB的细胞核移位。结果表明,在钙离子存在下,MBL能够直接与imDC结合,sTLR4和LPS可竞争性抑制MBL与imDC的结合。Western blot与ELISA分析结果显示,MBL能够以浓度依赖的方式结合sTLR4蛋白。FACS分析结果进一步表明,MBL通过结合imDC竞争性抑制LPS与imDC的结合。Western blot分析结果亦显示,MBL对LPS诱导的NF-κB细胞核移位有显著的抑制作用。结论:MBL可通过结合表达在imDC的TLR4分子竞争性抑制LPS结合imDC,从而抑制LPS诱导imDC成熟,提示MBL能够通过配体结合调控DC分化成熟。本研究为阐明MBL抑制LPS诱导DC成熟的机制提供了较好的实验依据。; 王凡平王明永郭晓芳石如玲徐素玲马淑君李海斌郭继强杨秀丽; 关键词：甘露聚糖结合凝集素细菌脂多糖树突状细胞 TOLL样受体-4

白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变分析被引量：7: 2015年; 目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性,阐明耐氟康唑白色假丝酵母菌Erg11基因突变。方法回顾性分析2011年6月-2012年12月医院患者送检各类标本分离的287株假丝酵母菌属,采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M27-A3推荐的微量稀释法进行体外药敏试验,从177株白色假丝酵母菌中筛选出7株对氟康唑耐药株,对氟康唑靶酶基因Erg11进行PCR扩增、测序,与Genbank上标准序列(X13296)比对分析。结果在7株白色假丝酵母菌氟康唑耐药株和1株敏感株中共发现25个点突变,其中15个同义突变,10个错义突变,10个错义突变分别为V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G、D116E、K119N、K128T、D153E、E266D,其中V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G是新发现的。结论成功分析了白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变。; 王明永翟晶晶左萌洁薛宁刘萌萌凌明智高继娟邢骏田文倩胡亚会于凤婷谭耀鹏王凡平; 关键词：白色假丝酵母菌氟康唑耐药性 ERG11基因突变

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河南省教育厅科学技术研究重点项目(12A320017)