国家自然科学基金(81172593) 作品数:10 被引量:9 H指数:2 相关作者: 刘青杰 封江彬 陆雪 赵骅 李爽 更多>> 相关机构: 中国疾病预防控制中心 军事医学科学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响 被引量:1 2014年 目的 研究电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响.方法 0、0.5、3和8 Gy60Co γ射线照射A549细胞后,利用JC-1探针检测照射后肺腺癌细胞A549线粒体膜电位的变化;使用ATP试剂盒检测辐射对A549细胞ATP生成的影响;利用实时定量PCR方法检测线粒体拷贝数.结果 在照射后24 h,各剂量组A549细胞膜电位出现明显改变(F=243.44,P<0.05),与0 Gy照射组相比,0.5和3 Gy照射的A549细胞线粒体膜电位显著升高(t=-10.12、-5.59,P<0.05),而8 Gy照射的线粒体膜电位显著降低(t=15.22,P<0.05),照后48 h各照射组线粒体膜电位基本恢复正常(F=10.36,P<0.05);照射后24 h ATP水平与膜电位变化趋势一致(F=97.08,P<0.05),其中0.5和3 Gy A549细胞中ATP水平升高(t=1.66、7.27,P <0.05),8 Gy照射组降低(t=-8.24,P<0.05);照射后48 h,ATP水平也发生变化(F =39.49,P<0.05),0.5和3 Gy照射后A549细胞中ATP水平显著高于0 Gy组(=4.60、8.53,P<0.05).照射后24 h线粒体拷贝数显著增加,其中0.5 Gy mtDNA拷贝数增加至对照组的12倍(t=0.02,P<0.05),3和8 Gy组mtDNA拷贝数分别增加至对照组的7和10倍(=9.68、15.10,P<0.05).结论 大剂量电离辐射会导致A549细胞线粒体膜电位降低,从而影响ATP的生成,中等剂量以下的照射会导致A549细胞线粒体膜电位代偿性增高,从而使ATP的生成增多,8 Gy以内的电离辐射可使mtDNA拷贝数代偿性升高. 高玲 刘巧维 冯先武 封江彬 刘青杰关键词:线粒体膜电位 三磷酸腺苷 辐射诱导染色体畸变的快速FISH方法的建立 2014年 目的:建立一种检测辐射诱导染色体畸变的快速荧光原位杂交(FISH)方法。方法:两步简并引物PCR法扩增人α-卫60星DNA,制备荧光基团直接标记的泛着丝粒探针;对Coγ射线照射后的人外周血淋巴细胞染色体标本进行FISH分析,荧光显微镜下检测着丝粒及染色体形态。结果:直接标记泛着丝粒探针杂交后显示所有染色体着丝粒均有较强的信号;应用制备的FISH探针检测到γ射线照射诱导的双着丝粒、着丝粒环和易位染色体畸变,37℃杂交5-12 h后经过简单的洗涤即可在荧光显微镜下检测到较好的信号。结论:本研究制备的直接标记泛着丝粒探针,可用于FISH快速检测辐射诱导的染色体双着丝粒体、着丝粒环和易位畸变。 李爽 陆雪 赵骅 封江彬 刘青杰关键词:荧光原位杂交 染色体畸变 ^60Coγ射线诱导人外周血淋巴细胞核质桥的剂量一效应关系研究 被引量:1 2014年 目的确定核质桥判定标准,建立^60Coγ射线诱导正常人外周血淋巴细胞中核质桥(NPB)的剂量一效应曲线。方法用^60Coγ射线照射3名健康男性离体外周血,照射剂量分别为0、1、2、3、4、5和6Gy,剂量率为1Gy/min,采用胞质分裂阻滞微核(CBMN)法进行细胞培养、收获、制片、染色。在光学显微镜下分析双核细胞中NPB及微核(MN)。结果在0~6Gy^60Coγ射线照射后,人外周血双核淋巴细胞中的NPB符合泊松分布,且NPB频率随吸收剂量增加而增加(H=19.51,P〈0.01),拟合回归方程为线性平方模式Y=(1.39×10-3)x2+(4.94×10-3)x(R2=0.981,P〈0.01)。结论成功建立0~6Gy^60Coγ射线诱导正常人外周血淋巴细胞中NPB的剂量一效应曲线。 赵骅 陆雪 陈德清 刘青杰关键词:电离辐射 微核 60Co γ射线照射正常人外周血基因组合表达模型的建立 被引量:1 2018年 目的 探讨基因组合表达模型作为辐射生物剂量计的可行性。方法 0~8 Gy 60Co γ射线照射正常人外周血,利用实时荧光定量PCR检测10个辐射敏感基因表达变化,应用逐步回归方法建立基因组合表达模型;双盲法验证模型估算剂量的准确性。结果 照后6和12 h,10个辐射敏感基因的表达水平随受照剂量的增加而增加,均呈现良好的剂量-效应关系(R2=0.61~0.97,P〈 0.05);TNFSF4、PHPT1和FDXR基因相对表达量存在较大的个体间差异;照后6 h,PCNA、CCNG1、TNFSF4、PHPT1、GADD45A和FDXR建立的基因组合表达模型R2为0.88(F=54.8,P〈0.001);照后12 h,PCNA、CCNG1、TNFSF4、MDM2、GDF15和TNFRSF10B建立的基因组合表达模型R2为0.82(F=42.767,P〈0.001);各时间点基因组合表达模型估算的受照剂量均接近于真实照射剂量。结论 基因组合表达模型具备作为辐射生物剂量计的基本条件。 李爽 封江彬 陆雪 田梅 刘青杰关键词:基因表达 生物剂量计 电离辐射 放射生物剂量学研究的新进展 被引量:2 2015年 放射生物剂量学方法在历次放射事故应急处置中起到非常重要的作用,主要采用非稳定性染色体畸变和微核分析。最近的研究关注快速高通量的生物剂量计的探索,不仅涉及上述方法的自动化,还涉及DNA双链断裂、基因表达等分子生物学剂量计的研究以及代谢组学和血清学指标的筛选。笔者主要就2012—2014年放射生物州量学研究的新进展进行综述。 蔡恬静 刘青杰关键词:细胞遗传学 分子生物学 低剂量照射诱导人淋巴细胞53BP1焦点形成的剂量-效应关系研究 被引量:2 2016年 目的:探讨低剂量60Coγ射线照射诱导人永生化淋巴细胞AHH-1中P53结合蛋白1(53BP1)焦点水平与照射剂量之间的关系。方法:用^(60)Coγ射线照射AHH-1细胞,照射剂量分别为0 m Gy、10 m Gy、25 m Gy、50 m Gy、100和200 m Gy,吸收剂量率为20 m Gy/min,37℃修复30 min后进行免疫荧光染色,利用激光共聚焦扫描显微镜分析细胞中53BP1焦点形成情况。结果:在剂量为0~200 mG y的^(60)Coγ射线照射30 min后,AHH-1细胞中53BP1焦点在每个细胞中的数目为0~4个,均符合泊松分布。从50 m Gy照射剂量开始53BP1焦点水平显著性增加,且焦点水平与照射剂量具有剂量-效应关系,剂量-效应曲线为y=(0.03×10^(-2))x+2.32×10^(-2)(R^2=0.9236,P<0.01)。结论:在低剂量电离辐射作用下,53BP1焦点水平具有较好的剂量-效应关系。 徐岩 封江彬 陆雪 李爽 高玲 田梅 蔡恬静 刘青杰关键词:低剂量照射 免疫荧光 低剂量60Coγ射线诱导人淋巴细胞核质桥适应性反应的研究 被引量:2 2016年 目的 以核质桥(NPB)为主要指标,探索低剂量60Co γ射线是否能诱导人外周血淋巴细胞的适应性反应及诱导剂量范围。方法 用60Co γ射线照射健康成年男子离体外周血,照射剂量分别为0、20、50、75、100、150和200 mGy(吸收剂量率为25 mGy/min),照射后间隔6 h后再给予2 Gy照射(吸收剂量率为1 Gy/min)。采用胞质分裂阻滞法(CBMN)进行细胞培养,观察NPB及微核(MN)的发生情况。结果 0~200 mGy剂量范围内,NPB和MN数目随吸收剂量的增加而增多,并拟合出NPB的线性平方模型y=(1.5×10-4)x2-(5.67×10-3)x+0.598 (R2=0.893 8)。提前给予75~100 mGy照射比直接受到2 Gy照射产生的NPB及MN数目均有所减少(U=2.66、2.97、3.96、5.89,P〈0.05),在100 mGy照射后NPB减少最多(43.2%)。结论 低剂量60Co γ射线可以诱导人外周血淋巴细胞的适应性反应,诱导剂量范围为75~100 mGy。 张梦凡 赵骅 陆雪 徐岩 封江彬 刘青杰关键词:电离辐射 人淋巴细胞S100A4基因在照射后不同时间点表达水平的剂量-效应关系 2015年 目的 应用实时荧光PCR技术检测不同剂量^60Co γ射线照射后不同时间永生化淋巴细胞系AHH-1中S100A4基因的表达变化情况,探讨其基因表达变化的剂量和时间效应关系.方法 永生化淋巴细胞系AHH-1接受0、1、3、5、8、10、15、18 Gy^60Coγ射线照射后4、8、12、24、48和72 h,利用反转录聚合酶链反应(PCR)以及实时荧光PCR技术检测细胞S100A4基因表达水平,分析各时间点其基因的相对表达水平与不同照射剂量之间的关系.结果 照射后各时间点,一定剂量范围内,AHH-1中S100 A4基因的表达水平上调,与照射剂量存在着一定的剂量-效应关系(R^2 =0.79~0.93,P<0.05);在一定时间范围内,AHH-1中S100A4基因表达水平的上调受照射后时间的影响(F=8.91,P<0.01).结论 在一定剂量范围内,辐射诱导的S100A4基因表达在转录水平的变化检测便捷,具有较好的剂量-效应关系,初步具备作为生物剂量计的基本条件. 冯建刚 李爽 封江彬 高玲 陆雪 陈德清 刘青杰关键词:实时荧光PCR S100A4 301例男性不育患者的Y染色体相关基因和染色体核型分析 被引量:1 2013年 目的探讨男性不育患者中Y染色体长臂AZF区域、短臂SRY基因的基因缺失和染色体改变所起的作用。方法对301例男性无精或少精症患者采用PCR技术进行基因(AZFa、AZFb、AZFc和SRY)微缺失的检测和染色体核型的分析。结果 301例患者中104例发现基因缺失,其中30例涉及AZFa缺失,40例涉及AZFb缺失,37例涉及AZFc缺失,31例涉及SRY缺失。10例染色体核型为47,XXY,1例为染色体易位46,XY,t(Dq;Dq),其余均为正常核型。1例染色体核型为47,XXY的患者AZFa缺失。结论 Y染色体上的SRY基因和AZF微缺失可能是导致男性不育发生的重要原因之一。应对患者尽早同时进行基因微缺失和染色体核型分析。 封江彬 陆雪 刘青杰关键词:AZF SRY 基因微缺失 染色体 1147例男性不育患者的G带核型分析 2013年 目的探讨男性染色体异常与男性不育的关系。方法对1147例男性不育症患者采用常规外周血淋巴细胞培养,制备染色体G带标本,进行染色体G带核型分析。结果被检测的1147例男性不育患者中,有97例染色体核型异常,占全部被检者的8.5%(97/1147)。其中性染色体数目异常80例,占总异常的82.5%,其中嵌合体8例,占8.2%;性反转有5例,占5.2%;染色体易位核型11例,占11.3%;倒位1例。结论染色体异常是导致男性不育的主要因素之一,应对男性不育患者进行常规染色体分析,有助于病因诊断和临床治疗方案。 封江彬 陆雪 赵骅 陈德清 刘青杰关键词:男性不育症 染色体异常