河南省教育厅自然科学基金(2008A310008)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王天云张俊河王芳董卫华王俐更多>>
- 相关机构：新乡医学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省教育厅自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- DNA标准分子量参照物的制备被引量：8
- 2009年
- 采用较简便的方法制备了1130～500bp的DNA标准分子量参照物（NAmarker）。经电泳检测，所制备的DNAmarker与商品化的DNAmarker质量相当，可用于分子生物学试验。
- 王芳张俊河昝玉玺徐祥辉王天云
- 关键词：DNAMARKERPCR凝胶电泳
- 核基质结合区的位置对转基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 为研究核基质结合区(MAR)序列不同插入位置对转基因表达作用的影响,PCR扩增人β-珠蛋白MAR分别插入到含氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因真核表达载体pCATG表达盒两侧、5′端及3′端.酶切鉴定后,用阳离子聚合物转染CHO细胞,G418筛选出阳性细胞克隆,ELISA分析CAT基因的表达水平,半定量PCR分析CAT基因相对拷贝数.结果表明,表达盒两侧含MAR序列的载体能提高介导的转基因表达水平平均提高10.4倍,5′端含MAR序列的载体表达水平平均提高3.9倍,3′端含MAR序列的载体反而降低转基因表达水平.5′端含MAR序列的表达载体其转基因相对拷贝数高于其它两组载体的基因拷贝数,转基因表达量与基因拷贝数不成正比.
- 张俊河昝玉玺王天云
- 关键词：核基质结合区转基因表达报告基因
- 转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用被引量：4
- 2009年
- [目的]探讨转基因下游MAR在稳定转化的CHO细胞中对基因表达的调控作用。[方法]将PCR扩增得到的人β-珠蛋白MAR插入到真核表达载体pCATG的下游,构建转基因表达盒3′端含MAR的表达载体。酶切鉴定正确后,转染CHO细胞,G418筛选出稳定转化的细胞株,ELISA分析转基因的表达水平,半定量PCR分析转基因相对拷贝数。[结果]结果表明,表达盒3′端含MAR序列能使转基因表达水平降低,其基因拷贝数则有一定程度的增加。转基因下游β-珠蛋白MAR在一定程度上能抑制外源基因的表达水平;外源基因表达量与基因拷贝数不成正比,未呈现出"拷贝数依赖性"。[结论]该研究结果为进一步研究MAR的调控机制奠定基础。
- 张俊河张艳芳王芳杨献军王天云
- 关键词：核基质结合区CHO细胞转基因报告基因
- 一种PCR酶切克隆目的DNA方法
- 2010年
- 以PCR扩增克隆survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆survivin启动子。通过软件在线分析扩增的survivin启动子酶切位点,将扩增与预期的片段大小一致的DNA片段进行酶切,再进行测序。结果表明,采取酶切鉴定PCR产物的方法,可以初步对PCR产物是否正确做出判断。
- 王俐张俊河董卫华王芳王天云
- 关键词：PCR引物酶切电泳
- 基于多重PCR的DNA Marker制备方法被引量：2
- 2010年
- 报道了一种简便的制备分子量大小为100-1000bp DNA marker的方法,其原理是以一段特异的DNA片段为模板,设计PCR引物,采用多重PCR的方法一次扩增100-1000bp系列条带,酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,即可得到条带清晰的DNA marker。
- 张俊河王俐董卫华王芳王天云
- 关键词：DNAMARKERPCR凝胶电泳
- 一种PCR结合DNA回收克隆基因方法被引量：1
- 2011年
- 目的探讨一种结合DNA片段回收扩增目的片段的方法。方法以PCR扩增克隆β-珠蛋白MAR和survivin启动子为例,根据GenBank报道的序列设计引物,PCR扩增克隆β-珠蛋白MAR和survivin启动子。结果 PCR产物有非特异DNA片段、根据DNA片段大小采取凝胶DNA回收与预期片段相符的DNA片段,送公司测序。测序结果表明所扩增的序列和Gen-Bank报道的序列一致。结论用该方法可以成功克隆出目的DNA片段。
- 董卫华王俐张俊河王芳王天云
- 关键词：聚合酶链反应引物电泳
- DNA Ladder的制备被引量：3
- 2011年
- 背景:目前,制备DNA分子量标准的方法主要有2种,一种是用限制性内切酶消化某种DNA,另一种是利用PCR扩增,2种方法各有优缺点。在前期采用PCR技术在前期扩增100～500bp片段的基础上,实验室又成功扩增出600～1000bp片段,PCR产物经过纯化,混匀,制备的DNA Ladder,结果制备DNA Ladder的条带清晰,易于识别,可完全与公司商品化的DNA Ladder相比,完全可用于分子生物学实验。目的:利用PCR扩增技术制备DNA分子量标准参照物。方法:自行构建了一种特殊适宜扩增的质粒pUC-DNA,根据pUC-DNA的基因序列,利用primer5.0设计能特异扩增100～1000bp的PCR引物。PCR扩增出100～1000bp大小的DNA片段,在2%琼脂糖凝胶中电泳观察结果。用凝胶回收试剂盒回收目的PCR产物,测序结果与pUC-DNA上基因序列进行序列比对,Blast进行同源性分析。将PCR产物用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,按比例混匀,即可使用。结果与结论:利用PCR技术能够成功扩增出100～1000bp条带,片段大小与预期结果相符,片段序列与GenBank序列完全一致,利用回收片段制备的DNA Ladder条带清晰,可与同类产品相比。
- 王俐董卫华张俊河王天云
- 关键词：PCR凝胶电泳
- 一种去除聚合酶链式反应引物二聚体的简便方法被引量：1
- 2012年
- 目的提供一种去除聚合酶链式反应(PCR)引物二聚体的简便方法。方法根据聚乙二醇(PEG)能够选择性沉淀DNA片段的原理,确定分别去除100 bp、100～200 bp、100～300 bp条带的PEG 6000最终质量分数,因引物二聚体大小一般为200 bp,最终运用到去除含有引物二聚体的PCR产物中。结果最终质量分数为10.67%、9.00%、8.00%的PEG能分别除去100 bp、100～200 bp、100～300 bp条带。最终质量分数为24.00%的PEG能有效去除PCR引物二聚体并纯化PCR产物。结论 PEG 6000能有效去除PCR扩增产物的引物二聚体,达到纯化PCR产物的效果。
- 林艳李照熙董卫华王天云
- 关键词：聚乙二醇6000聚合酶链式反应
