教育部基金(20070312001)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：郭锡熔朱春朱金改张春梅邱洁更多>>
- 相关机构：南京医科大学中国人民解放军南京医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：教育部基金江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗STEAP4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的制备兔抗人STEAP4多克隆抗体及其特性鉴定。方法应用DNAStar软件对STEAP4的蛋白序列进行分析,选择STEAP4基因编码蛋白的近N端序列合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)交联。以纯化的STEAP4免疫新西兰白兔,制备抗STEAP4蛋白多抗,间接ELISA检测兔血清效价,Westernblot和免疫组织化学法鉴定多抗的特异性。结果得到兔抗人STEAP4多肽抗体,效价达16000。ELISA及蛋白印迹证实兔抗人STEAP4抗体可特异性识别STEAP4多肽。Westernblot结果显示该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为52000。以一抗采用STEAP4多克隆抗体的脂肪组织石蜡切片为检测标本,进行STEAP4组织定位研究,发现STEAP4蛋白表达于脂肪细胞膜;以上结果皆与STEAP4的生物信息学分析一致。结论成功制备了抗STEAP4多克隆抗体,制备的兔抗人STEAP4合成肽抗体可应用于Westernblot和免疫组织化学试验,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础。
- 朱春季晨博邱洁张春梅倪毓辉刘峰陈晓慧朱金改费莉郭锡熔
- 关键词：多克隆抗体蛋白印迹
- STEAP4蛋白在人脂肪组织中表达大小的验证被引量：1
- 2010年
- 目的采用STEAP4多克隆抗体对其在人脂肪组织中的表达大小进行验证。方法 6例阑尾炎手术患儿中随机选取3例患儿的脂肪组织标本,抽提总蛋白,应用本实验室自制的STEAPG蛋白多克隆抗体,采用Westernblot技术检测STEAP4蛋白在人脂肪组织中表达的大小。结果目的条带出现于蛋白Marker相对分子质量55000以下位置,与STEAP4蛋白预测相对分子质量52000基本相符。结论本实验室自制的STEAP4蛋白多克隆抗体具有良好的免疫学活性,能够满足STEAP4免疫印迹检测的实验要求。STEAP4蛋白在人脂肪组织中的相对分子质量约为52000,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础。
- 邱洁周晓玉程锐王玢朱春朱金改郭锡熔
- 关键词：肥胖
- 肿瘤坏死因子-α对人脂肪细胞STEAP4蛋白膜转位的影响及其机制
- 2011年
- 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脂肪细胞STEAP4蛋白膜转位的影响,并分析其可能的机制。方法应用1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIX)、地塞米松、胰岛素、罗格列酮方案诱导人前体脂肪细胞分化,以人重组TNF-α或加用细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD-98059干预人成熟脂肪细胞24 h,采用Western blot技术检测细胞膜蛋白与总蛋白中STEAP4蛋白的表达。结果 TNF-α干预能显著促进人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白向细胞膜转位;ERK抑制剂PD-98059联合TNF-α与单独应用TNF-α诱导人成熟脂肪细胞的细胞膜蛋白和总蛋白中STEAP4蛋白的表达水平比较均无显著差异。结论 TNF-α干预显著促进人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白的膜转位,初步排除丝裂原活化蛋白激酶信号途径参与这一调控机制。
- 邱洁周晓玉程锐季晨博秦大妮郭锡熔
- 关键词：肥胖肿瘤坏死因子-A
- STEAP4基因在人前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达被引量：3
- 2010年
- 目的观察人肥胖相关全长新基因STEAP4在人前体脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨STEAP4基因与脂肪细胞分化、脂质积聚的关系。方法体外培养人前体脂肪细胞,待细胞生长融合后以1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素及罗格列酮联合诱导方案,在体外诱导其分化为成熟脂肪细胞。在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化过程中观察细胞形态及脂质积聚变化;采用实时荧光定量RT-PCR技术检测诱导分化不同时段(前体,第0、4、6、8、11、14、17天)脂肪细胞中STEAP4基因mRNA的表达水平。结果STEAP4基因高表达于人前体脂肪细胞;加入脂肪细胞分化诱导剂后(第4天)表达略有上调,其后随脂肪细胞分化成熟该基因表达量呈逐渐下降趋势;至脂肪细胞完全分化成熟(第14-17天)表达量最低。STEAP4基因表达水平除在诱导分化前至第4天、第14-17天差异无统计学意义外,余各时间点的表达水平差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论STEAP4基因随脂肪细胞分化成熟表达逐渐下调,可促进脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚,与肥胖的发生有关。
- 陈小慧赵亚萍高春林张春梅朱春朱金改郭锡熔
- 关键词：分化
- TNFα对人脂肪细胞STEAP4基因表达的调控
- 2009年
- 目的人STEAP4基因是一个参与胰岛素敏感性调节的肥胖相关差异表达基因,本研究旨在探讨胰岛素抵抗相关脂源性细胞因子TNFα对人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的调节作用。方法体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用不同浓度(0、5、10、25、50ng/mL)人重组TNFα干预成熟脂肪细胞24h,采用实时荧光定量RT-PCR技术、Western blot技术检测干预后人成熟脂肪细胞STEAP4基因在核酸和蛋白表达水平的变化。结果不同浓度TNFα(5、10、25、50ng/mL)干预24h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的mRNA表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);50ng/mLTNFα干预时STEAP4基因在人成熟脂肪细胞中的mRNA表达水平最高。与基因表达结果相一致,不同浓度TNFα(5、10、25、50ng/mL)干预24h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白的表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);干预浓度提高到25ng/mL时干预效果最为明显。结论TNFα能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因核酸和蛋白的表达。
- 陈小慧赵亚萍朱春季晨博张春梅朱金改高春林郭锡熔
- 关键词：细胞分化肿瘤坏死因子
