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国家公益性行业科研专项(201103008): 作品数：24 被引量：129H指数：6; 相关作者：张文东赵焕云张富强张应国范泉水更多>>; 相关机构：云南省动物疫病预防控制中心成都军区疾病预防控制中心云南农业大学更多>>; 发文基金：国家公益性行业科研专项云南省科技计划项目云南省农业科技创新工程项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

细粒棘球蚴线粒体CO1基因的克隆与序列分析被引量：6: 2015年; 目的研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulasus)种间遗传标记特点,为该虫种的分子分类学研究提供基础。方法在内蒙古地区从羊肝脏采集细粒棘球蚴,肝包虫病患者手术剥离囊包后,签署知情同意书,采集细粒棘球蚴。提取虫体DNA,扩增线粒体细胞色素氧化酶1(CO1)基因,将其克隆到PGM-T载体后,用PCR技术鉴定阳性菌落,并进行测序,运用DNAstar5.0软件计算序列间的相似性,计算遗传距离,同时,应用MEGA4.0软件的最大似然法(ML-Maximum Likelihood)和邻接法(NJ-Neighbor Joining)构建系统发育树,进行聚类分析。结果细粒棘球蚴DNA扩增出的羊株、人株CO1基因序列片段长度为936bp。同其他亲缘关系较近的属CO1基因序列比对:羊株、人株细粒棘球蚴CO1序列与黄花棘球绦虫的同源性最高,分别为91.9%、91.2%;羊株、人株细粒棘球蚴CO1序列与黄花棘球绦虫位于同一分支,自展值(Boostrap)最高,均为100%。羊株、人株细粒棘球蚴CO1序列所属分支与原头目的 Proteocephalus macrocephalus所属分支相隔较远。结论CO1基因序列稳定保守,无宿主特异性,可作为细粒棘球蚴理想的种间遗传标记。; 于晶峰李滨刘晓松常建华杨晓野王瑞杨莲茹李秀霞木兰; 关键词：细粒棘球蚴克隆

口蹄疫LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度和中和抗体滴度相关性的比较研究被引量：1: 2012年; 为了评价口蹄疫液相阻断LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度、中和抗体滴度的关系,本研究对野外采集的38份牛血清分别进行LPB-ELISA、正向间接血凝(IHA)和微量细胞中和试验(VNT),检测各份血清的LPB-ELISA抗体滴度、血凝抗体滴度和中和抗体滴度,并进行相关性分析比较。结果表明LPB-ELISA抗体滴度和中和抗体滴度相关性极显著,相关系数r=0.489(P<0.01);LPB-ELISA抗体滴度和血凝抗体滴度相关系数仅为0.149,血凝抗体滴度和中和抗体滴度相关系数为0.179,相关性均不显著。本研究为利用LPB-ELISA方法进行口蹄疫血清学监测和普查提供了试验依据。; 廖德芳孙强苗海生高林李乐信爱国朱明旺李华春; 关键词：口蹄疫抗体滴度

细粒棘球蚴(Echinococcusgranulosus)CO1与ND1基因序列分析: 2014年; 目的为了明确内蒙古锡林郭勒盟西乌旗羊株和锡林浩特市人株细粒棘球蚴之间的基因型及其遗传变异情况。方法利用分子生物学技术对采自两地区细粒棘球蚴的线粒体CO1基因与ND1基因进行了克隆和测序,并运用DNAStar5.0中的MegAlign工具对已测出的序列进行了分析。结果西乌旗羊株细粒棘球蚴与锡林浩特市人株细粒棘球蚴CO1基因片段和ND1基因片段大小分别均为936bp和895bp。西乌旗羊株细粒棘球蚴CO1基因序列与新疆羊株细粒棘球蚴的CO1基因序列同源性为99.3%;锡林浩特市人株细粒棘球蚴CO1基因序列与新疆人株细粒棘球蚴的CO1基因序列同源性为98.6%;且西乌旗羊株和锡林浩特市人株细粒棘球蚴ND1基因与国内外已报道的G1型ND1基因序列完全相同。结论表明内蒙古上述两地区细粒棘球蚴的同源性很高,且基因型均为G1型,这为内蒙古某些地区细粒棘球蚴流行虫株的确定提供了重要依据,同时也对当地细粒棘球蚴病的预防和控制具有重要意义。; 于晶峰谭伟李滨刘晓松常建华杨晓野王瑞杨莲茹李秀霞; 关键词：细粒棘球蚴基因型

2012年-2013年云南边境禽流感病毒 H5N1亚型血凝素基因分析被引量：2: 2014年; 为了解2012年-2013年云南边境禽流感病毒 H5N1亚型血凝素（HA）基因变异及进化特征，在云南边境采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品1500份，经禽流感病毒 H5N1亚型特异性多重 RT-PCR 检测，选择代表性阳性样品，进行病毒 HA 基因扩增、纯化、克隆和测序，并与已知毒株和参考毒株序列进行序列比对及系统遗传进化分析。结果自1500份样品中检出 H5N1亚型阳性样品60份，60份阳性样品病毒 HA基因测序获得23种 HA 序列，可划分为2个不同进化分支（2．3．2，2．3．4），2．3．2进一步可划分为3个进化小分支（Ⅱ-1～Ⅱ-3），在23份代表性阳性样品中，17份样品属于进化小分支2．3．2Ⅱ-1，3份属于2．3．2Ⅱ-2，其余3份属于2．3．4；阳性样品中病毒 HA 裂解位点序列均具有高致病性禽流感病毒分子结构特征，HA受体结合位点、糖基化位点、表位关键性氨基酸位点及其他氨基酸位点存在变异，部分位点的变异具有分支或亚（小）分支特异性。2012年-2013年期间云南边境禽流感病毒 H5N1亚型间具有遗传差异，进化分支2．3．2Ⅱ-1成为当地流行的优势毒株。; 刘庆亮张文东赵焕云胡挺松段博芳曾伟胡媛媛邱薇范泉水张应国宋建领张富强; 关键词：禽流感病毒 H5N1亚型血凝素分子特征

2013年云南省禽流感病毒H9N2亚型监测及其血凝素基因序列分析被引量：4: 2015年; 为了解H9N2亚型禽流感病毒（AⅣ）的变异情况,本研究对2013年云南省16个地区的3 622份家禽临床样品进行AⅣ的鸡胚分离和RT-PCR检测,其中分离鉴定到97份H9N2亚型AⅣ分离株,并选取21个分离株进行HA基因测序及系统进化分析,结果表明：21份H9N2亚型AⅣ分离株的HA基因核苷酸序列同源性为86.0 ％～99.4％,均属于欧亚分支的类A/Chicken/BeiJing/1/1994亚分支,而且又进一步划分为Ⅲ-1、Ⅲ-2两个小分支.其中Ⅲ-2分支为云南地区新出现的进化分支.氨基酸比对分析显示,测序的21个HA基因编码蛋白的裂解位点基序均具有低致病性病毒分子特征;与现用疫苗株相比,HA推导氨基酸序列中存在多个氨基酸位点差异;其中,Ⅲ-1与Ⅲ-2分支的AⅣ的HA氨基酸序列多个位点存在各自特有的点突变（氨基酸替换）,这种变异具有一定的进化（亚）分支特异性.此外,HA基因多个受体结合位点氨基酸存在变异,其中234位氨基酸全部变为L,呈现了人流感受体结合特性;部分糖基化位点、抗原表位关键性氨基酸也存在变异.; 胡媛媛张文东宋建领刘庆亮曾伟王锐郑锦玲彭洁保志鹏张应国范泉水赵焕云张富强; 关键词：禽流感监测 H9N2亚型血凝素

云南边境地区禽流感H5N1亚型病毒NS基因进化分析被引量：1: 2013年; 目的阐明云南边境地区禽流感H5N1亚型病毒NS1、NS2基因变异特征及遗传进化关系。方法在云南边境地区采集境外家禽和野生鸟类棉拭子样品，经H5N1亚型特异性多重RT-PCR检测，阳性样品对病毒NS基因进行扩增，克隆至pMD18-T载体测序，获得NS1、NS2基因序列，并与已知参考毒株序列进行序列比对及系统发育分析。结果自1240份样品中检出H5N1亚型阳性样品71份，阳性率为5．72％；30份代表性阳性样品病毒NS基因测序获得17种序列，存在3个不同进化（亚）分支（Ⅰ-1、Ⅰ-2、Ⅱ）；NS1／NS2基因与病毒血凝素（HA）基因呈现不同进化关系；NS1蛋白涉及核定位信号区、RNA结合区、效应区及其他致病性相关的关键性氨基酸位点存在替代或突变。结论云南边境地区H5N1亚型病毒NS1／NS2基因具有遗传差异，2010年以来NS基因进化分支Ⅰ-2、Ⅱ已成为当地流行的优势毒株。; 肖雪张文东段博芳赵焕云刘庆亮胡挺松邱薇冯子良郑颖范泉水张应国张富强; 关键词：禽流感病毒 H5N1亚型

2013年云南省禽流感H9N2亚型病毒神经氨酸酶基因序列分析被引量：1: 2015年; 目的了解2013年云南省禽流感H9N2亚型病毒NA基因变异及进化特征。方法对2013年云南省禽流感H9N2监测阳性样品进行NA基因克隆、测序及系统发育分析。结果 2013年云南省禽流感H9N2亚型病毒株NA基因核苷酸序列同源性为84.5%-99.5%,属于欧亚分支的类ADKHKY28097分支和类ACKHKG997分支。类ADKHKY28097分支为目前云南优势分支,且又进一步划分为Ⅰ-1、Ⅰ-2小分支。氨基酸比对分析表明,2013年云南毒株NA蛋白402位糖基化位点存在显著变化,161位新增了一个糖基化位点;唾液酸结合位点、抗原位点存在显著变异;酶活性位点稳定。除上述关键性氨基酸位点外,其余位点与现用疫苗株、参考毒株相比存在显著差异;且Ⅰ-1、Ⅰ-2、Ⅱ分支毒株多个位点存在各自特有的氨基酸替代,这种替代具有一定的进化（亚）分支特异性。结论 2013年云南省H9N2亚型禽流感病毒间具有遗传差异,类ADKHKY28097分支已成为当地流行的优势毒株,NA蛋白存在特异性氨基酸变异位点。; 胡媛媛张文东宋建领张应国赵焕云张富强; 关键词：禽流感病毒 H9N2亚型神经氨酸酶

口蹄疫病毒持续感染的研究进展被引量：4: 2012年; 从口蹄疫病毒和其宿主两个方面综合阐述了口蹄疫病毒持续感染形成的原因,旨在为进一步阐明口蹄疫病毒持续感染的机理和降低持续感染对口蹄疫防控存在的威胁提供理论依据。; 周强包慧芳刘在新; 关键词：口蹄疫病毒宿主相互作用

云南省边境地区口蹄疫抗体检测被引量：7: 2017年; 应用口蹄疫O、A、Asia-1型cELISA抗体检测试剂盒和口蹄疫非结构蛋白抗体单抗阻断ELISA试剂盒,对采集自云南省10个边境县的牛和猪血清进行检测。检测结果显示,牛口蹄疫O、A、Asia-1型抗体阳性率分别在9.23%~37.75%、3.00%~23.57%、9.75%~48.67%之间,阳性率偏低,并且地区间差异较大。非结构蛋白抗体阳性率在14.16%~51.00%之间,其中勐海为51.00%、芒市为48.96%,动物带毒风险较大。境内牛与境外入境牛口蹄疫O、A、Asia-1型抗体阳性率基本相当,非结构蛋白抗体阳性率略高于境内牛。由于入境牛免疫率较低,须加大对入境牛的监控。黄牛和水牛口蹄疫O、A、Asia-1型抗体阳性率基本一致,但黄牛非结构蛋白抗体阳性率为36.47%,水牛为26.86%,黄牛阳性率显著高于水牛,这可能是因为云南省边境地区的黄牛主要来自印度、孟加拉国,经缅甸进入我国。猪口蹄疫血清抗体阳性率较低,除芒市O型口蹄疫抗体阳性率达到81.00%外,其余均在0~6.00%之间,这可能与云南省近年来大量免疫合成肽疫苗有关。建议加强云南省边境地区的口蹄疫防控工作,提高口蹄疫免疫密度和抗体水平,严控边境地区口蹄疫易感动物的无序流动。; 廖德芳苗海生李乐寇美玲王文华沙丽东李国华李华春; 关键词：口蹄疫边境地区抗体检测

全球口蹄疫防控技术及病原特性研究概观被引量：60: 2015年; 口蹄疫是危害猪牛羊等主要家畜畜种的疫病,可造成巨大的经济损失,引发严重的负面社会影响,被中国政府列在一类动物疫病的首位。中国猪、牛、羊养殖量最大、邻国众多,防控口蹄疫不仅对本国农牧业发展起关键作用,而且对全球口蹄疫防控有重要意义。目前,除一些发达国家消灭了口蹄疫并保持着无疫状态外,口蹄疫仍在众多发展中国家流行或散发。中国周边口蹄疫疫情不断,对中国造成高压威胁,近年流行的O/ME-SA/Pan Asia、O/SEA/Mya-98和A/ASIA/Sea-97病毒均是传入的。从周边流行的病毒、流行的频率和循环的区域位置判断,O/Pan Asia-2、A/Iran-05、Asia1/Sindh-08和O/Ind-2001病毒未来威胁依然较大。几十年来,中国不断完善各级兽医服务体系,充分发挥国家口蹄疫参考实验室科研带动、技术指导、疫情监控的职能,采取疫苗强制免疫为主的防控政策,卓有成效。依照世界动物卫生组织(OIE)推荐的口蹄疫渐进控制路线图(PCP-FMD),中国目前处于阶段3。推进口蹄疫防控效果进入更高阶段,关键在诊断检测技术和疫苗。自主研发的液相阻断ELISA、非结构蛋白3ABC抗体检测ELISA、多重RT-PCR等已达世界先进水平,有力支撑了中国口蹄疫诊断检测工作,并在朝鲜、越南等国应用。新一代测序、胶体金和纳米示踪材料标记免疫层析和生物反应效应分子检测等更精准便捷的新技术,未来也有望在口蹄疫诊断中实现应用。全病毒灭活疫苗免疫效力最优,是目前应用的主要疫苗,但存在干扰鉴别诊断等缺陷。随着免疫学理论和基因工程技术的进步,发展和应用标记疫苗、活载体疫苗、表位蛋白疫苗和病毒颗粒样疫苗等新型疫苗是未来的趋势。近十余年来,反向遗传操作凭借其定向改造基因组等强大技术优势,不仅促进了标记疫苗等新型基因工程疫苗的研发,而且推动了口蹄疫病毒宿主嗜性、复制; 刘在新; 关键词：口蹄疫病原特性

国家公益性行业科研专项(201103008)

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