江苏省卫生厅资助项目(H200938)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李玉华管晓虹朱进冯振卿贾筱琴更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体并观察其介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对人肝癌细胞CTGF(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法:针对已经筛选确定的人CTGF基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与Plk0.1-GFP-SP6载体连接产生shRNA慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定。用脂质体转染法将质粒共转染293T细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,Real-timePCR、Western-blot检测CTGFmRNA和蛋白的表达。结果:PCR与DNA测序证实合成的含CTGF shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。经RNA干扰后的靶细胞CTGF mRNA以及蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建人CTGF基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染HepG2细胞可有效降低CTGFmRNA和蛋白的表达,为以CTGF基因为靶点的肝癌基因治疗研究奠定了基础。
- 程海清贾筱琴李红李玉华朱进管晓虹冯振卿
- 关键词：RNA干扰CTGF慢病毒肝癌
- GRO-α的原核表达及对细胞增殖作用的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建含有GRO-α(生长调节癌基因-1)的重组表达载体,优化重组蛋白在E.coli BL21(DE3)中表达,分析其对肿瘤细胞的增殖作用的影响。方法:RT-PCR扩增GRO-α基因片段,克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白表达。经亲和层析柱纯化目的蛋白,作用于人乳腺癌细胞系MCF-7,应用CCK8检测其对细胞增殖的影响。结果:成功构建pGEX-4T-1/GRO-α原核表达质粒,高效表达GRO-α-GST融合蛋白,大小为34ku。细胞增殖实验结果显示,该蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7增殖具有促进作用。结论:重组GRO-α-GST融合蛋白具有生物学活性,可促进人乳腺癌细胞的增殖,为今后制备相应抗体奠定基础并为乳腺癌的靶向治疗提供新的方法。
- 陈晓笑唐奇朱进仇镇宁李玉华王祝鸣管晓虹冯振卿
- 关键词：重组蛋白MCF-7
