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铜离子对绵羊PrP^C重组蛋白结构转化的影响: 2007年; 为探明铜离子在朊蛋白构象转化中的作用机制,进一步研究构象病发生机制提供基础数据,利用DNA重组技术,绵羊朊病毒蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得绵羊PrPC重组蛋白(OvPrPC),与氯化铜在体外结合。对CuCl2处理后的蛋白进行圆二色谱(CD)和蛋白酶K(PK)消化试验进行转化调节后蛋白抗性分析。结果表明,OvPrPC分子量为25172.80u,其二级结构主要由α-螺旋构成,含少量β-折叠。经过CuCl2体外调节后,OvPrPC结构中α-螺旋减少,β-折叠增加。而蛋白酶K消化后,CuCl2作用后的蛋白产生了PK抗性。为进一步的神经细胞毒性试验提供了宝贵的材料,进而为探讨构象病发生机理提供有力的科学依据。; 刘美丽赵德明周向梅尹晓敏; 关键词：CUCL2 圆二色谱

结核分枝杆菌感染实验模型被引量：9: 2008年; 结核分枝杆菌是引起人结核病的主要病原,全世界约有1/3人口感染结核分枝杆菌。尽管该病原可感染并引起许多动物疾病,但人类是其中心宿主。为研究结核分枝杆菌的致病机理及宿主对本病原的保护性和免疫病理学反应,选择合适的动物模型非常必要。本文阐述了结核病研究中常用的实验模型及各种模型的优缺点。实验模型的合理应用将促进我们对结核病的认识,从中获取的资料将有助于我们发现更好的预防和治疗方案。; 张交儿周向梅孙斌尹晓敏杨建民赵德明; 关键词：结核分枝杆菌动物模型

RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用: 2008年; 本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。; 李玉荣周向梅尹晓敏杨建民乔俊文赵德明; 关键词：RNAI C6细胞朊蛋白超氧化物歧化酶

PrP106-126对大脑皮质神经元和星形胶质细胞朊蛋白基因表达的影响: 2008年; 采用实时荧光定量RT-PCR的方法,对PrP106-126处理的大脑皮质神经元和星形胶质细胞模型进行了朊蛋白基因表达相对定量的研究。大脑皮质神经元经PrP106-126处理后,与SCR处理组和对照组相比,基因表达量明显下降。PrP106-126处理的星形胶质细胞与对照组和SCR处理组相比,朊蛋白基因的表达量显著升高。该试验结果为深入了解TSEs的分子致病机制和正常朊蛋白的功能提供了基础数据。; 宁章勇赵德明杨建民周向梅于博孔小明尹晓敏; 关键词：星形胶质细胞基因表达传染性海绵状脑病

绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析被引量：1: 2006年; 利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrP^C插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21 (DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23～256)。经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在。将包涵体蛋白用8mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的目的蛋白。由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象。采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右。为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0．4mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测。结果表明：通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量为25172．80u左右。经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23～256)的二级结构含量为：α螺旋为39．4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60．6%。绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据。; 刘美丽赵德明周向梅尹小敏; 关键词：原核表达圆二色谱

Westernblot检测奶牛生殖系统朊蛋白的分布: 2008年; 张太翔田国宁张金玲田国华赵德明; 关键词：生殖系统传染性海绵状脑病慢性消耗性疾病朊蛋白奶牛牛海绵状脑病

牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2: 2006年; 为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。; 李晶晶赵德明徐广贤周向梅尹晓敏; 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达免疫印迹蛋白纯化

朊蛋白在奶牛生殖系统特异性表达的研究: 利用实时荧光定量RT-PCR技术,采用GAPDH基因做内参照,对奶牛生殖系统的12个不同部位组织提取总RNA,进行PrP基因表达的定量研究。结果发现,雌雄奶牛的生殖系统各部分组织都有PrP基因表达,其中雌性奶牛的卵巢、子...; 张太翔赵德明; 关键词：实时荧光定量RT-PCR; 文献传递

多肽PrP106-126对巨噬细胞迁移效应的影响: 本文采用趋化试验的方法,将PrP106-126倍比稀释作用于巨噬细胞,计算趋化指数来研究PrP106-126对巨噬细胞的趋化活性,确定PrP106-126对巨噬细胞的最佳趋化浓度.结果发现PrP106-126对巨噬细胞有...; 周海云周向梅尹晓敏张仲秋赵德明; 关键词：巨噬细胞趋化作用激酶抑制剂 P物质信号转导; 文献传递

绵羊重组PrPc蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定: 本研究将纯化的绵羊重组蛋白PrP(23-256),免疫Balb／c小鼠,经细胞融合和 2～3次克隆,用间接ELISA方法筛选出两株能够稳定分泌抗prion蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D11和2G1,Western bl...; 周向梅梁芳王志刚乔俊文赵德明; 关键词：绵羊单克隆抗体 WESTERN-BLOT; 文献传递

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