国家科技支撑计划(2008BAI56B01)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：于修平鲁茁壮洪涛邹小辉董流昕更多>>
- 相关机构：山东大学中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人细小病毒B19病毒样颗粒的制备被引量：3
- 2009年
- 采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9细胞表达B19VP2蛋白,通过间接免疫荧光、Western blotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的VLPs。本研究成功制备了人细小病毒B19的VLPs,为B19感染血清学检测方法的建立提供了参考。
- 邹小辉董流昕宋敬东屈建国于修平鲁茁壮洪涛
- 关键词：细小病毒B19VP2杆状病毒病毒样颗粒
- 建立设有内对照的Real-time PCR方法检测人血清中细小病毒B19被引量：2
- 2010年
- 目的 建立设有内对照的TaqMan探针Real-time PCR方法 ,用于检测人血清中细小病毒B19.方法 人工合成2段DNA序列,克隆到T载体,线性化后进行DNA定量,分别作为模板标准品和内对照;合成1对引物和不同荧光素标记的2条探针,2条探针分别能与阳性模板或内对照结合,建立设有内对照的B19 Real-time PCR检测方法 .对方法 的稳定性进行了评价,并应用于人血清B19病毒检测.结果 获得了B19检测标准DNA和内对照DNA,确定了内对照的添加量,建立了使用内对照的Real-time PCR检测方法 .对160份血清标本进行了检测,检出2份阳性标本,病毒DNA浓度分别为2.1 × 105Geq/ml和3.6×103Geq/ml.结论 成功建立了人细小病毒B19 Real-time PCR检测方法 ,可用于人血清B19检测;由于使用了内对照,该方法 有利于排除假阴性检测结果 .
- 李萌邹小辉王敏于修平鲁茁壮洪涛
- 关键词：聚合酶链反应血清学试验
