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机械牵张力对人成骨样细胞糖链影响的初步研究: 2012年; 目的:研究机械牵张力对人成骨肉瘤MG-63细胞糖蛋白糖谱表达的影响。方法:以Flex-cell细胞应力培养系统对人成骨肉瘤MG-63细胞施以形变率为12%,加载时长分别为4、8、12、24 h的周期性张应变,利用凝集素芯片技术筛选出糖蛋白糖谱中差异表达的糖蛋白糖链,比较不同加载时长下成骨样细胞表面糖谱的变化。结果:8 h加力组表达差异最明显,在加力后实验组凝集素Jacalin、LEL、GSL-I、DBA、RCA、VVA、ACA的亲和作用增强,而对凝集素WFA、EEL、AAL、LCA、STL的亲和作用减弱,提示在机械牵张力作用下成骨样细胞表面可能出现增多的黏蛋白T/Tn抗原;I-抗原;N-乙酰半乳糖胺(包括α1-3链接方式),α及β链接半乳糖结构和减少的岩藻糖α1-2链接半乳糖;核心岩藻糖;N-乙酰葡糖胺结构等。结论:通过凝集素芯片技术研究发现受机械应力刺激后的成骨样细胞表面糖链变化与时间呈相关性,可推测在加载8 h后成骨样细胞已具备了某些骨化的早期表现。在加载4 h后成骨样细胞便出现对信号转导的重要调节修饰,为研究骨改建信号转导发生机制提供了糖组学理论支持。; 李少妮崔继红李菲菲陈富林李铮冯雪; 关键词：人成骨肉瘤MG-63细胞机械牵张力糖蛋白

机械牵张应力刺激成骨细胞的差异蛋白质组学研究被引量：9: 2010年; 目的应用蛋白质组学方法分析人成骨样细胞Saos-2在牵张应力作用下蛋白质表达的差异,为更全面地阐明成骨细胞对牵张应力的反应机制提供分子基础。方法将Saos-2分为加力组与对照组,采用Flexcell牵张应力加载系统,用12%大小的应力值进行力学刺激24 h后,应用蛋白质双向凝胶电泳分离蛋白样品,质谱技术鉴定差异表达蛋白点,并用生物信息学分析差异蛋白参与的生物学过程和主要功能。结果对照组和加力组分别得到(1031±41)和(928±25)个蛋白质点,质谱鉴定出肽酰脯氨酰异构酶A样3、线粒体ATP合成酶、抗氧化蛋白1、丝切蛋白1、蛋白磷酸酶1、延伸因子2等17个表达增高的差异蛋白质,涉及应激反应、能量代谢、细胞增殖、细胞骨架重建、信号转导及成骨分化等生物学功能。结论成骨细胞在机械牵张应力作用下蛋白表达发生显著变化,这些差异蛋白参与了成骨细胞力学反应机制的不同过程。; 李菲菲丁寅冯雪王欢陈富林李立文; 关键词：成骨细胞蛋白质组学信号转导

不同浓度海藻酸盐凝胶的力学特性及其对软骨细胞增殖能力的影响被引量：5: 2012年; 细胞外基质的理化性能影响着细胞的命运并调节组织形成。为探索最佳的软骨细胞体外三维生长环境,本研究通过改变藻酸盐浓度测定了海藻酸盐小球的力学特性及其对软骨细胞增殖能力的影响。凝胶的压缩机械性能通过INSTRON3365测定,结果发现浓度越高其压缩模量越大,表明凝胶对抗应变的能力越强。同时选取4w龄乳兔关节软骨细胞分别包裹在浓度为1%、2%和3%(w/v)海藻酸盐小球中连续培养4周,结果发现所有3组软骨细胞都表现出有限的增殖并形成类似于软骨组织的细胞簇,其中较低浓度组(1%和2%)增殖更明显。这些结果表明软骨细胞在海藻酸盐凝胶小球中连续培养有少量增殖,且较低浓度的藻酸盐更有利于软骨细胞的增殖,说明藻酸盐凝胶的力学特性影响了软骨细胞的增殖能力。; 任利玲冯雪马东洋陈富林丁寅; 关键词：软骨细胞海藻酸盐机械性能

海藻酸盐小球中培养的软骨细胞的生长被引量：3: 2011年; 目的为海藻酸盐水凝胶作为软骨细胞三维培养环境提供实验依据。方法将酶消化法获取的P1代软骨细胞包裹在20 g/L海藻酸钙凝胶小球中持续培养4周,在培养的不同时间点取适量的小球行倒置相差显微镜观察,HE、番红"O"染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色;并通过MTT法检测细胞活性及增殖;二甲基亚甲兰法进行氨基葡聚糖(GAG)含量测定。结果在海藻酸钙小球内培养的软骨细胞能够保持球形状态,且随时间的延长,细胞增殖逐渐聚集成簇;细胞外基质沉积逐渐增加,GAG含量增多。Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,鉴定证实为具有正常表型的软骨细胞。结论软骨细胞在海藻酸盐凝胶小球中培养有效维持了细胞的分化状态,细胞增殖并具有良好的分泌蛋白功能。海藻酸钙凝胶适合于软骨细胞的生长。; 任利玲冯雪马东洋王建卫陈富林丁寅; 关键词：软骨细胞海藻酸盐细胞培养

动态压力作用下微囊化软骨细胞差异蛋白质组学研究: 2011年; 应力作用下软骨细胞代谢和功能的改变是导致软骨组织不断生长改建的主要原因。但目前,动态压力作用下调控软骨细胞生物学行为变化的分子机制尚不清楚。该研究借助于蛋白质组学技术,通过给藻酸盐三维培养的软骨细胞施加0.2 MPa、0.66 Hz动态压力持续作用4 h,比较加压组和未加压组蛋白表达的变化。结果10个蛋白点发生了变化:2个在加压培养后表达消失,2个在加压培养后出现表达,6个表达增强。进一步通过质谱分析和蛋白鉴定识别出6个有意义的蛋白质,分别是:proly14-hydroxylase alpha I、pyruvate kinase、L-lactate dehydrogenase A、proly1 4-hydroxylasesubunitβ、destrin isoform和αenolase。为今后深入研究这些差异蛋白在软骨细胞受压力刺激后代谢和功能变化的生物学作用奠定了基础。; 任利玲冯雪马东洋余占海陈富林丁寅; 关键词：软骨细胞海藻酸盐差异蛋白质组学

机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化影响的初步研究被引量：17: 2012年; 目的:研究不同力值及加力时间的机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:采用Flexcell牵张应力加载系统,对成骨样细胞Saos-2进行不同力值、不同时间的刺激,MTT法检测细胞受力后的增殖变化;ALP试剂盒检测细胞受力后ALP活性的变化;半定量RT-PCR检测骨钙蛋白(OC)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA的表达;用茜素红染色观察矿化结节形成。结果:当应变值为12%时,力学刺激对成骨样细胞Saos-2增殖以及ALP活性的促进作用最强(P<0.01)。应变值为12%的力学刺激呈时间依赖性明显上调了成骨样细胞Saos-2的增殖、ALP活性以及骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的表达(P<0.01);牵张应力刺激组较对照组更加容易形成矿化结节。结论:大小适宜的牵张应力可以促进成骨细胞的增殖以及分化指标如ALP活性、骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的转录水平、矿化结节的形成等,说明机械牵张应力对于成骨细胞的增殖和分化发挥着重要的调控作用。; 李菲菲丁寅陈富林李少妮冯雪; 关键词：成骨细胞增殖碱性磷酸酶骨钙蛋白骨桥蛋白

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国家自然科学基金(30870594)