国家自然科学基金(30500301)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- MicroRNA对基因表达调控的研究进展被引量：3
- 2007年
- MicroRNA（miRNA）是一类长约21～25nt的内源性单链小分子RNA（small RNA），可调节与其序列互补mRNA的表达，普遍存在于高等生物界，在不同物种间具有高度的保守性，表达具有细胞特异性或组织特异性。通过与mRNAs特异性的碱基配对，引导靶序列进入降解或（和）翻译抑制，以此参与个体发育、细胞分化、细胞增殖、物种进化以及疾病发生过程中的基因表达调控。该文简述了近年对miRNA的形成、功能、作用机制等研究的新进展，并对其在基因沉默中的作用作了重点概述。
- 严忠海龙健儿
- 关键词：MIRNA基因调控基因沉默
- 双荧光标记法定量检测Igf-2r在克隆牛组织中的表达
- 2008年
- 目的建立克隆牛Igf-2rmRNA实时定量PCR的检测方法,并探讨Igf-2rmRNA的表达在克隆牛发育中的作用。方法用Trizol抽提正常及克隆牛的脑、肺、心、肝组织RNA,运用本研究建立的实时荧光定量PCR方法检测各组织中Igf-2rmRNA的表达情况。结果正常牛各组织中每μg总RNA中含Igf-2rmRNA拷贝数分别为107.39(脑)、108.04(肺)、107.25(心)、107.99(肝)。克隆牛中,每μg总RNA中含Igf-2rmRNA表达水平变化较大。与正常牛相比,克隆牛不同组织中Igf-2rmRNA的表达水平变化较大,在同一克隆牛的不同组织以及不同克隆牛的同一组织中Igf-2rmRNA的表达水平相差较大,提示在克隆牛不同组织中Igf-2rmRNA的表达水平不一。结论Igf-2rmRNA的表达水平与动物的生长发育有一定的关系,Igf-2r基因的表达异常可能与胎牛过度肥大和围产期死亡等现象有一定的关系。对克隆牛各组织中Igf-2rmRNA的表达的精确定量有助于进一步研究Igf-2r基因在动物生长发育中所起的作用。
- 蔡霞龙健儿
- 关键词：克隆牛实时荧光定量PCR
- DNA甲基化对牛Igf-2r表达的影响及其在克隆牛发育中的作用被引量：4
- 2007年
- 目前认为克隆效率低的主要原因是供体核的不完全重编程导致发育过程中一些重要的基因异常表达。运用DNA甲基化转移酶抑制剂5′-脱氧胞苷(5′-azacytidine,5′-aza)处理MDBK细胞(牛肾上皮细胞),并通过实时荧光定量PCR方法对Igf-2r基因的表达进行了定量分析;在此基础上,应用亚硫酸盐甲基化测序法检测正常牛及克隆牛脑、肺、心、肝组织Igf-2r印迹调控区DMR2(DNA differentially methylated region,DMR)及非印迹调控区3′-UTR(3′-untranslated region,UTR)的DNA甲基化水平。研究发现,5′-aza处理MDBK细胞后,Igf-2r基因的表达上调。正常牛各组织中Igf-2r DMR2区的DNA甲基化程度差异较大,3′-UTR区较稳定;与正常牛相比,克隆牛DMR2区的甲基化程度变化较大,3′-UTR区无显著性变化。结果表明,DNA甲基化修饰影响Igf-2r基因的表达。正常牛不同组织中Igf-2r基因DMR2区的DNA甲基化程度不同,提示Igf-2r基因的印迹调控方式在不同组织中可能不同。克隆牛发育过程中,调控Igf-2r基因印迹的DMR2表观结构被明显改变,而非印迹调控区3′-UTR则无明显变化,提示Igf-2r基因印迹调控区被破坏,很可能是导致克隆牛发育异常的一个重要原因。
- 蔡霞龙健儿
- 关键词：表观遗传克隆牛DNA甲基化基因印迹
