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利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究: 2013年; 研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。; 徐静卓志勇邓守龙张运海刘国世连正兴张金龙; 关键词：超数排卵 IVM 转基因克隆绵羊

肉用黑萨福克绵羊超数排卵和配种授精方案的优化被引量：10: 2013年; 本研究旨在优化肉用黑萨福克绵羊超排方案，筛选生产条件下最佳配种授精方式，提高黑萨福克体内胚胎生产效率，建立高效绵羊胚胎移植体系。供体超数排卵采用不同超排方案、不同FSH剂量、不同配种授精方式、不同侧卵巢超排效果、不同季节以及重复利用6组因素的比较试验。结果表明：采用CIDR＋FSH＋PMSG递减4d8针注射法供体平均黄体数16．00个／只、可用胚数14．00枚／只和移植妊娠率71．43％，效果最好（P〈0．05）；FSH注射剂量范围在200～260IU，超排平均黄体数、平均可用胚胎数分别为14．87、13．28枚／只，高于160—200IU组和260～320IU组（P〈0．05）；开膣器输精＋自然交配＋开膣器输精方法供体冲出卵子的受精率97．32％、平均可用胚数11．25枚／只，高于其他2种配种方式（P〈O．05）；不同侧卵巢超排效果无差别；繁殖季节（秋季）供体平均黄体数13．00个／只、可用胚10．75枚／只，高于非繁殖季节（P〈0．05）；重复超排效果无明显差异。本研究获得了黑萨福克绵羊超数排卵的技术参数，优化了黑萨福克绵羊超排方法和配种授精方案，建立了高效的胚胎移植体系。; 柴孟龙刘国世汪锋付瑶吕文发田秀芝卓志勇富俊才; 关键词：超数排卵胚胎移植

影响黑萨福克绵羊体内原核胚生产的因素: 2015年; 为提高黑萨福克绵羊原核期胚胎的生产效率,通过CIDR＋FSH＋PMSG和CIDR＋FSH＋PG两种激素方案对供体进行超数排卵,将冲出的胚胎移植入同期发情处理的受体。其中CIDR＋FSH＋PMSG注射组供体平均黄体数、可用胚数和移植妊娠率均高于CIDR＋FSH＋PG注射组（P〈0.05）。同时,在CIDR＋FSH＋PMSG注射组,不同FSH剂量注射对黑萨福克绵羊超数排卵有影响。在180-240 IU剂量组,供体羊的平均黄体数、可用胚胎数高于另一组。繁殖季节（秋季）供体平均黄体数、可用胚胎数均显著高于春季（P〈0.05）。; 柴孟龙魏巍何长久王军卫喜明张洪涛陈洋刘大森吕文发刘国世; 关键词：超数排卵原核胚

外源褪黑素对牛卵母细胞体外成熟的影响被引量：8: 2011年; 【目的】探索外源褪黑素(melatonin,MT)处理对牛卵母细胞体外成熟的影响从而优化牛体外胚胎生产体系。【方法】在牛卵母细胞成熟过程中添加不同浓度的MT,观察并统计其体外受精后胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。应用放射免疫分析法检测血清、卵泡液和成熟培养液内MT与孕酮(P)、雌激素(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平的变化并检测卵母细胞的活力和活性氧(ROS)的浓度。【结果】存在于牛卵泡液中的MT浓度与血清中的相近,添加10-11 mol.L-1 MT组的P浓度(2.01±0.33)ng.mL-1显著高于对照组((0.87±0.10)ng.mL-1,P<0.05)。与对照组((67.32±7.30)%)相比,10-9 mol.L-1 MT组卵裂率显著提高((77.81±7.06)%,P<0.05),并能提高囊胚率且囊胚细胞数((29.61±9.55)%,(90.30±28.74)个),显著高于对照组((19.64±9.22)%,(75.07±25.98)个,P<0.05);同时,10-9 mol.L-1 MT组卵母细胞的活力高于对照组,并能降低卵母细胞内的ROS含量但没有显著差异(P>0.05)。【结论】牛卵泡液中存在MT,适当浓度的外源MT能促进牛卵母细胞体外成熟。; 高超田秀芝张璐徐静汪锋卓志勇戴蕴平刘国世; 关键词：褪黑素卵母细胞体外成熟活性氧

影响山羊体内原核胚生产的因素研究被引量：1: 2014年; 为提高山羊原核期胚胎生产效率,实验选取107只供体山羊（1～5岁）进行超数排卵并收集原核胚胎,探索山东地区不同山羊品种（嘉祥羊和沂水羊）、季节、体重、供体山羊使用次数、超数排卵方案对超数排卵及冲胚效果的影响。结果表明：嘉祥羊、沂水羊2个品种原核胚生产效率相似;春季与秋季山羊平均冲胚数、可用胚数、移植妊娠率无显著差异（P〉0.05）;体重40 kg以上的羊冲胚效果显著高于30～40 kg的供体山羊（P〈0.05）;供体山羊手术次数大于3次时,获得的可用胚胎数开始下降,5～6次最低达到显著差异（P〈0.05）;CIDR＋FSH慢减量4 d 8针注射法在平均黄体个数、平均冲胚数和平均可用胚数方面均显著高于CIDR＋FSH减量4 d 8针注射法（P〈0.05）。综上所述,选择手术次数小于等于3次,体重40 kg以上的山羊作为供体,采用CIDR＋FSH慢减量4 d 8针注射法的超排方案可以提高原核胚生产效率。; 张航秦文向任康宋玉坤常连忠姚玉昌连正兴吕文发刘国世; 关键词：原核胚超数排卵山羊

黑萨福克和杜泊绵羊超数排卵效率比较及分析被引量：5: 2015年; 本试验的目的是比较黑萨福克和杜泊绵羊超数排卵效率的差异,并进一步分析差异产生的原因。20只黑萨福克绵羊和10只杜泊绵羊用FSH递减法超数排卵,获得的胚胎用于移植103只受体。结果表明,黑萨福克绵羊平均回收胚胎11.0±7.1枚,杜泊绵羊14.3±6.7枚,差异不显著(P>0.05);移植2枚可用胚的黑萨福克组和杜泊组产羔受体绵羊,可用胚发育效率无差异(75%和80%,P>0.05);整体水平上,黑萨福克绵羊获得后代的几率显著低于杜泊绵羊(44.7%和88.9%,P<0.05)。说明两品种绵羊回收的胚胎数量没有差异,但质量有差异;黑萨福克超数排卵效率低于杜泊绵羊,但与母羊繁殖力无关,可能因公羊精液品质或者输精方式所致。; 易金云李继成任超董德权刘国世吕文发; 关键词：超数排卵胚胎移植人工输精

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国家科技支撑计划(2011BAD19B02-4)