江苏检验检疫局科研项目(2005KJ01)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：张睿段宏安石德时毕丁仁周毅更多>>
- 相关机构：华中农业大学连云港出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：江苏检验检疫局科研项目武汉市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：6
- 2009年
- 从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法。结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg.mL-1,血清的最佳稀释倍数为1∶80,阳性判定标准确定为样品OD450 nm大于0.451。用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%。
- 周毅吴玉石段宏安张睿周祖涛毕丁仁石德时
- 关键词：牛白血病病毒原核表达间接ELISA
- 地方流行性牛白血病间接gp51-ELISA抗体检测试剂盒的研制被引量：1
- 2009年
- 利用重组牛白血病痛毒gp51蛋白作为包被抗原研制了gp51-ELISA诊断试剂盒。试剂盒主要成分包括抗原gp51包被96孔板、HRP标记的兔抗牛IgG和牛白血病阴性、阳性标准血清。对试剂盒进行了特异性、灵敏度、重复性及保存期试验。结果表明，试剂盒特异性好，灵敏度是AGIDT的4-8倍，批间和批内的变异系数分别小于10％和15％，于-20℃保存至少能保持6个月检测结果稳定。与法国Synbiotics公司同类试剂盒进行比对试验，诊断敏感性、特异性和符合率分别为75％、96.1％和94.6％。对采集于山东济南的164份奶牛血清和进口澳大利亚奶牛的398份血清进行检测，抗体阳性率分别6.10％和4.77％。
- 吴玉石周毅段宏安张睿徐晔毕丁仁石德时
- 关键词：间接ELISA诊断试剂盒
