辽宁省教育厅高校重点实验室项目(2009S043)
- 作品数：7 被引量：46H指数：4
- 相关作者：刘宏生朱春玉郑方亮艾海新朱俊丰更多>>
- 相关机构：辽宁大学辽宁省生物大分子计算模拟与信息处理工程技术研究中心黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高校重点实验室项目国家自然科学基金病毒学国家重点实验室开放研究基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程自然科学总论更多>>
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达被引量：3
- 2012年
- 禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。
- 郑方亮朱春玉商玲玲马杰良孙婷婷艾海新朱俊峰段艳婷朱应刘宏生
- 关键词：NS1原核表达纯化
- “太岁”生物学组分的研究被引量：18
- 2011年
- ＂太岁＂是一种存在于地球上分类地位尚不清楚的生物体。对实验室保藏的7种不同的＂太岁＂样品进行了生物学组分的定性定量分析,旨在科学地了解＂太岁＂的组成成分,同时为＂太岁＂有效成分的开发利用和分类鉴定提供理论依据。对实验室保藏的7种＂太岁＂样品做生物组分及含量分析,具体包括：苯酚硫酸法测粗多糖含量、凯氏定氮法测粗蛋白含量、索氏提取法测粗脂肪含量、钒钼酸显色法测核酸含量、灼烧重量法测粗灰分含量、恒温干燥法测水分含量、原子吸收法测微量元素含量。实验结果表明,7种＂太岁＂样品含水量均较高,除LNUT006含水量73.58%外,其余＂太岁＂样品均达到90%以上;＂太岁＂样品中粗多糖含量在8.97~46.57 mg/g之间,其中LNUT006多糖含量明显高于其他＂太岁＂样品;粗蛋白含量在20.35~184.18 mg/g之间,其中LNUT006蛋白含量明显高于其他＂太岁＂样品;＂太岁＂样品中净核酸含量在2.053~35.128 6μg/g之间;灰分含量在42.93~246.4 mg/g之间;＂太岁＂样品钙、铁含量较高,分别为2 907.09μg/g和3 929.09μg/g,铅、镉含量最低。首次对未知生物＂太岁＂样品的组成成分进行初步系统的研究,为明确其组分和对其进一步的开发利用均有很重要的意义。
- 朱春玉白婷婷姜秋实郑方亮艾海新朱俊丰刘宏生
- 微波结合紫外诱变选育辅酶Q_(10)高产菌株被引量：6
- 2010年
- 以根瘤土壤杆菌LNUB335为出发菌株,以维生素K3和NaN3双抗性为筛选标记,在根瘤土壤杆菌中首次利用紫外线及微波联合诱变处理,获得1株生产性能比LNUB335显著提高的突变株ARN007,其CoQ10产量为12.01mg/L,较出发菌株提高68.67%,每克干细胞含CoQ102.46mg,较出发菌株提高38.20%。通过传代实验证明该突变株的遗传性稳定,可作为进一步研究的实验菌株。
- 朱俊丰郑方亮艾海新朱春玉季士坤丁国伟白婷婷王加友李雪娇朱光宇刘宏生
- 关键词：辅酶Q10诱变育种微波
- 禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究被引量：1
- 2011年
- 为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞中的分布、亚细胞定位情况。成功构建了真核重组表达质粒pEGFP-N1-NS1,并在293T细胞及Hela细胞中得到高效表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明NS1蛋白主要分布在细胞核,在胞浆中有少量表达。本研究成功在哺乳动物细胞中表达NS1蛋白,并对其进行亚细胞定位,为流感病毒的相关功能研究奠定了基础。
- 朱春玉孙婷婷郑方亮艾海新朱俊丰王宁商玲玲刘宏生
- 关键词：禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位
- 桦褐孔菌子实体与菌丝体三萜化合物提取及活性比较研究被引量：11
- 2012年
- 为探索桦褐孔菌菌丝体与子实体在药用价值上是否存在差别,采用有机溶剂冷浸、超声回流法提取桦褐孔菌菌丝体及子实体的三萜化合物,通过薄层层析和红外光谱分析,确定两种来源的三萜化合物是相同或近似的同系物。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和杯碟法测定两种来源三萜化合物对癌细胞和细菌的抑制作用,菌丝体三萜化合物对人胃癌细胞株MGC-803的最高抑制率可达到38.27%。结果证实人工培养的桦褐孔菌菌丝体同样具有子实体的药用价值,为人工培养桦褐孔菌菌丝体提供了依据。
- 朱春玉郑方亮邵丽杰冯华炜郭立雄刘宏生
- 关键词：桦褐孔菌三萜化合物抑菌活性
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2011年
- 克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NSl基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础.
- 朱春玉孙婷婷郑方亮艾海新朱俊峰王宁商玲玲刘宏生
- 关键词：NS1蛋白原核表达纯化
- 生防链霉菌F-15摇瓶发酵条件的优化被引量：4
- 2010年
- 采用单因素和正交试验设计,通过摇瓶培养对链霉菌菌株F-15产生抑菌活性物质的发酵条件进行优化。单因素试验结果表明,其最佳发酵条件为:玉米粉作碳源,KNO3作氮源,初始pH为7,培养时间为5 d,250 mL的摇瓶装液量为60 mL,接种量为150μL。优化后的培养基配比为:玉米粉3.0%、KNO33.0%、MgSO40.2%、NaCl 0.2%。
- 朱春玉朱俊丰马杰良王艳红任娟刘宏生
- 关键词：链霉菌发酵条件生物防治
