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雪莲PBP基因表达载体的构建被引量：7: 2006年; 目的:利用新疆雪莲特殊功能基因磷脂酰乙醇胺结合蛋白基因(XLPBP)与基础质粒构建植物表达载体pXLPBP,为介导该基因在植物中表达,以期提高植物抗寒力的转基因研究打下基础。方法:利用设计好的两端加有EcoRⅠ酶切位点的引物,对XLPBP全长基因片段进行PCR扩增,获得700bp左右大小的片段,将其纯化回收并与同样经过EcoRⅠ酶切的质粒pCAMBIA3301连接;然后采用冻融法和电击法,将含XLPBP基因的载体pCAMBIA3301转入根癌农杆菌中。结果:通过一系列分子克隆方法获得含雪莲XLPBP基因的植物表达载体,并经PCR实验证实。结论:利用以自身携带的非编码区为调控序列的XLPBP全长基因和双向表达载体pCAMBIA3301为基础构建植物表达载体,可望提高外源基因表达量。; 李萍艾秀莲王志方王博; 关键词：雪莲磷脂酰乙醇胺结合蛋白根癌农杆菌

新疆陆地棉转化雪莲XLPEBP基因的研究被引量：8: 2007年; 研究构建了一个含有除草剂基因和雪莲XLPEBP基因的重组质粒pXLPEBP,以新疆陆地棉(新石K5和新陆早17号)为材料,采用花粉管通道法进行转基因研究,对转基因后代进行除草剂筛选和PCR鉴定,结果表明,除草剂基因及雪莲XLPEBP基因已经整合到陆地棉基因组中。; 吕秀娟危晓薇艾秀莲罗淑萍; 关键词：雪莲花粉管通道法

雪莲类PEBP基因在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：1: 2008年; 本实验旨在构建雪莲类PEBP基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化类PEBP基因所编码的蛋白,为进一步研究奠定基础。将雪莲类PEBP基因开放阅读框序列克隆到原核表达载体pET30(+)上,转化感受态表达菌株BL21(DE3),低浓度IPTG低温诱导融合蛋白的表达,纯化产物,Western blotting鉴定目的蛋白。IPTG低温诱导PEBP,经SDS-PAGE分析,其相对分子量约为28kD,与预期相符,表达量约占菌体蛋白的26.8%,并且通过亲和层析纯化了重组融合蛋白,Western blotting鉴定为阳性。成功构建了原核表达载体pET-PEBP,获得了高效表达产物,并为进一步研究雪莲类PEBP基因的抗冻功能打下基础。; 王志方张学军王博周小云艾秀莲; 关键词：磷脂酰乙醇胺结合蛋白原核表达雪莲

新疆陆地棉转雪莲PEBP基因抗寒性研究被引量：9: 2009年; 在环境气温骤降情况下,研究了转雪莲XLPEBP基因陆地棉后代的抗寒性,结果表明,2份转基因陆地棉后代(T2)材料,抗寒性显著高于对照材料,其中的功能基因有一定的表达作用。; 周小云马盾危小薇艾秀莲黄乐平; 关键词：花粉管雪莲棉花抗寒性

应用差减杂交筛选雪莲低温特异表达基因被引量：3: 2007年; 目的:获得雪莲低温特异表达基因cDNA全长片段。方法:以低温诱导雪莲为目的材料,常温诱导为对照,采用抑制差减杂交(SSH)方法,构建了雪莲的差减cDNA文库,筛选文库并得到38个cDNA片段。结果:利用GenBank数据库Blastx进行同源性搜索发现有22个非冗余克隆,其中18个已知基因4个未知基因。结论:同源分析表明冷诱导基因和磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)也在其中。所取得的结果为日后进一步对新疆雪莲抗寒机理的研究和更好地分离低温特异表达基因奠定了基础。; 王博艾秀莲王志方李芳罗明张学军; 关键词：抑制差减杂交新疆雪莲特异表达基因

新疆雪莲全长cDNA文库构建及表达序列标签(ESTs)特性分析被引量：7: 2008年; 以野生新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kit)为研究材料,利用Creator SMARTTMcDNA Library Construction技术构建了雪莲全长cDNA文库,从野生雪莲中提取总RNA和mRNA,用分离到的微量mRNA合成cDNA第1链。通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA。将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上,并对噬菌体进行包装,建成cDNA的全长库。经大肠杆菌XL1-Blue平板检测,原始文库滴度达4.03×107(pfu/mL)。随机挑选500个克隆进行序列测定,PCR鉴定结果显示多数插入片段均在500 bp以上。将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较,共有56个序列为非冗余数据。其中有14个cDNA片段序列在GenBank上无明显的同源性,42个片段与已报道的基因有较高的同源性。这些EST数据为进一步筛选和克隆雪莲特异性表达基因提供了材料平台,为雪莲基因组数据增补了大量信息。; 王博艾秀莲王志方李芳罗明; 关键词：新疆雪莲 CDNA文库表达序列标签

抗冻蛋白研究进展被引量：12: 2003年; 抗冻蛋白是一种能抑制冰晶生长的蛋白质或糖蛋白质。自二十世纪60年代发现以来,研究对象先后从极区鱼类、昆虫、转移到植物材料上。抗冻蛋白包括抗冻糖蛋白、抗冻蛋白Ⅰ、抗冻蛋白Ⅱ、抗冻蛋白Ⅲ、抗冻蛋白Ⅳ。简要介绍了各种抗冻蛋白的生化特征、抗冻机制及其应用研究,并对抗冻蛋白的基因工程作了系统综述。; 李芳王博艾秀莲王志方付建红; 关键词：抗冻蛋白冰晶生化特征抗冻机制基因工程

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国家自然科学基金(30160039)