烟台市科学技术发展计划项目(2010172)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：李波清杜东龙孙万菊张珍杨茗更多>>
- 相关机构：滨州医学院滨州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：烟台市科学技术发展计划项目山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌GroEL基因真核表达载体构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建幽门螺杆菌热休克蛋白GroEL基因的真核表达载体pcDNA3.0-GroEL,为幽门螺杆菌的基因疫苗研制提供参考依据。方法提取幽门螺杆菌基因组DNA,PCR扩增GroEL基因,克隆至pMD19-T载体,通过PCR、酶切及测序鉴定后,将GroEL基因片段用限制性内切酶切下,克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建pcDNA3.0-GroEL重组质粒;采用PCR、酶切对重组质粒pcDNA3.0-GroEL进行鉴定。结果扩增出幽门螺杆菌GroEL基因片段约1 640 bp;pcDNA3.0-GroEL重组质粒经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切,产生1个与GroEL基因PCR产物大小一致的小片段和1个不同于pcDNA3.0-GroEL重组质粒的大片段,表明GroEL基因已成功插入pcDNA3.0质粒中。结论成功构建幽门螺杆菌GroEL基因真核表达载体pcDNA3.0-GroEL。
- 李波清张玉梅李娜吴玉龙耿丽
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60GROEL基因疫苗
- 幽门螺杆菌临床分离株热休克蛋白60基因序列分析被引量：3
- 2014年
- 目的分析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)临床分离株热休克蛋白60基因编码区序列特征。方法对分离自我国不同地区、患有不同胃肠疾病患者的63株Hp提取基因组DNA并设计hsp60特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增hsp60基因,经1%琼脂糖凝胶电泳后切胶回收、纯化PCR产物并测序,用DNAstar 5.0软件中的Clustal W程序对hsp60基因序列及由该序列翻译的氨基酸序列进行比较分析。结果成功特异性扩增并纯化到hsp60全基因序列。经序列比对,发现不同胃肠疾病来源的hsp60基因核苷酸序列在877、1 399以及1 579位点处存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。其中来源于非胃癌患者的Hp在以上三位点处分别有8株(8/48,16.67%)G→A置换,9株(9/48,18.75%)C→G置换,7株(7/48,14.58%)A→G置换;胃癌患者来源的Hp在以上三位点处分别有3株(3/18,16.67%)G→A置换,1株(1/18,5.55%)C→G置换,2株(2/18,11.11%)A→G置换。将核苷酸序列翻译为氨基酸序列后,在以上三位点所对应的氨基酸序列,即293、467以及527位点处分别发生了由缬氨酸(V)到异亮氨基酸(I)、谷氨酰胺(Q)到谷氨酸(E)以及苏氨酸(T)到丙氨酸(A)的改变。结论我国Hp临床分离株热休克蛋白60基因序列存在单核苷酸多态性位点。
- 孙万菊杜东龙孙辉周秀芝张珍李波清
- 关键词：幽门螺杆菌单核苷酸多态性
- 红花黄色素B对AngⅡ诱导内皮细胞线粒体损伤的保护作用被引量：12
- 2012年
- 血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）作为血液与组织之间的屏障,参与多种生理和病理过程,其功能异常与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等有紧密的联系[1？4]。血管紧张素Ⅱ（angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ）可促进内皮细胞内活性氧自由基（reactiveoxygen species,ROS）的生成,
- 王超云张树平许勇杨茗姜文国栾海云
- 关键词：[CA2+]I线粒体膜电位细胞色素C氧化酶活性氧自由基
- 孕期弓形虫感染对小鼠胎盘补体调节蛋白表达水平的影响
- 2011年
- 目的通过检测弓形虫感染对C57BL／6孕鼠胎盘补体调节蛋白的表达水平，探索孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制。方法将C57BL／6孕鼠随机分为感染组和正常对照组，每组12只，感染组每只孕鼠于孕8d腹腔注射200个弓形虫强毒株（RH株）速殖子，对照组于相应时间注射等量生理盐水。所有孕鼠均于孕14d无菌分离胚胎组织，观察胎鼠发育情况。采用实时荧光定量PCR检测胎盘补体调节蛋白Crry、GPI-DAF及CD59a的mRNA的表达水平；采用流式细胞术检测胎盘单细胞悬液中Crry、GPI．DAF阳性细胞率。结果弓形虫感染导致感染组死胎率显著升高（感染组死胎率为80．95％，对照组为4．41％），两组之间差异有统计学意义（P〈0．01）；弓形虫感染组及对照组Crry、GPI-DAF和CD59a的mRNA表达水平分别为0．786±0．199、0．594±0．096、0．880±0．179和0．550±0．077、0．221±0．074、0．591±0．075，3类补体调节蛋白感染组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）；感染组和对照组Crry、GPI-DAF的阳性细胞百分率分别为（10．03±2．11）％、（2．95±1．04l％和（3．15±1．32）％、（0．66±0．26）％，两类补体调节蛋白感染组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论弓形虫感染导致孕鼠胎盘3种补体调节蛋白Crry、GPI—DAF及CD59a表达水平均升高，打破了母胎界面维持正常妊娠所需的免疫微环境，这可能是孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫棚制之一．
- 刘现兵胡雪梅张海霞张瑞金付强徐晓艳
- 关键词：不良妊娠
- 幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的定点突变及其原核表达被引量：5
- 2013年
- 目的定点突变幽门螺杆菌标准菌株ATCC26695 hsp60基因的1398、1399位点,并获得基因突变后hsp60基因的原核表达蛋白。方法采用Primer Premier5.0软件设计hsp60基因的2对引物,引入2个突变位点,通过重叠延伸PCR法进行3次扩增,获得突变型hsp60基因,克隆至原核表达载体pEASY-E1,重组质粒转化至E. coli BL21(DE3),对其进行测序验证,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果将幽门螺杆菌hsp60基因1398、1399位点AG突变为GC,构建了突变型hsp60基因的表达载体,转化大肠埃希菌后高效表达可溶性hsp60蛋白。结论构建了突变型hsp60基因表达载体,并能表达可溶性目的蛋白,为对其功能研究奠定了基础。
- 孙万菊杜东龙蒋宏张珍杜镇镇李波清
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白60定点突变原核表达
