贵州省科学技术基金(J[2010]2156)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 一条土壤来源S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因克隆与进化分析
- 2011年
- 目的获取土壤来源基因编码s-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,为通过基因工程生产s-腺苷甲硫氨酸创造条件。方法设计基因特异简并引物,以土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到一条基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明该基因为放线菌来源基因。结果该基因全长编码区为1209bp,推测该基因编码全长为402个氨基酸残基,等电点(PI)为4.68、分子量为43452道尔顿,含有S-腺苷甲硫氨酸合成酶全酶必备的3个完整功能区的酸性蛋白质。进化分析表明该蛋白与天蓝色链霉菌A3(2)来源的s-腺苷甲硫氨酸合成酶基因相似性高达98%。结论成功从土壤总DNA中克隆得到1条链霉菌同源的s-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,为进一步利用该蛋白奠定了基础。
- 吕玉红凌锌岳昌武
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸合成酶进化分析
- 链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建
- 2013年
- 根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该1条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明:该基因为放线菌来源chs基因.分别在该基因5'末端和3'末端分别引入的限制酶NcoI和EcoR I酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple-T/chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089 bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点(PI)为5.41、分子量为3 965道尔顿含有CHS保守功能区的酸性蛋白质.分析表明,该基因与Streptomyces lividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93﹪,氨基酸序列相似性高达87.70﹪.测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中.
- 肖静吕玉红李园园陈雪梅彭廷文周春伶曾令荣保玉心凌锌岳昌武
- 关键词：查尔酮合成酶基因克隆原核表达
