国家自然科学基金(3066141)
- 作品数：18 被引量：63H指数：6
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- 新疆牛巴贝斯虫病的流行病学调查被引量：4
- 2011年
- 【目的】2006～2008年对全疆14个地州的牛巴贝斯虫病进行流行病学调查。【方法】使用已建立的牛巴贝斯虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-MSA-2作为抗原。【结果】(1)新疆存在着牛巴贝斯虫病。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清7份,感染率为2.52%。在2007年的532份牛血清样品中检出阳性血清32份,感染率为3.13%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清43份,感染率为5.28%。(2)2008年在地方流行性疫病区牛巴贝斯虫感染率高达28%。(3)牛巴贝斯虫病所在的地州由2006年的5个扩大到2008年的11个。【结论】新疆牛巴贝斯虫病的感染率逐年上升,疫区面积不断扩大,流行区内感染率激增,牛巴贝斯虫病的防治不容忽视。这是新疆首次利用血清学方法对全疆牛巴贝斯虫病进行大规模的流行病学调查。
- 简子健马素贞孙其喆沈炯玉吕伟苗中秋
- 关键词：牛巴贝斯虫流行病学调查感染率
- 牛环形泰勒虫巢式PCR诊断方法的建立被引量：10
- 2008年
- 根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tamsl基因序列设计2对巢式引物，成功建立了环形泰勒虫病的巢式PCR快速检测方法。验证试验结果表明，PCR扩增产物测序结果与GenBank收录的Tamsl序列同源性在92％～99％，对环形泰勒虫检测具有良好的特异性、重复性以及灵敏度。对新疆焦虫病疫区牛群血样检测发现，巢式PCR检出率为62．2Yoo（61／98），高于常规PCR检出率（58．2％，57／98）和血涂片镜检检出率（35．7％，35／98），提示该巢式PCR方法可用于大规模的环形泰勒虫病的流行病学调查。
- 简子健黄家雨马素贞王晓萍袁江玲苏贵成苗中秋沈炯玉张兰江李晓军
- 关键词：牛环形泰勒虫巢式PCR
- 牛双芽巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立被引量：2
- 2010年
- 【目的与方法】根据Genbank上登陆的双芽巴贝斯虫HSP20基因设计两对引物,SHSP-P1与SHSP-P2和SHSP-P3与SHSP-P4,以其建立牛双芽巴贝斯虫巢式PCR快速检测方法。【结果】第一次、第二次扩增的退火温度均为57℃,分别扩增出约631和409 bp的条带,与预期的大小相符,而作为对照样本的牛巴贝斯虫、牛环形泰勒虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。将感染双芽巴贝斯虫的全血基因组DNA做10倍递减稀释到106倍扩增时,巢式PCR还能见到目的条带,其灵敏度相当于4.6 pg/mL全血基因组DNA。在对50份疫区牛全血DNA样本检测中,阳性检出率分别为22%(11/50)。【结论】所建立的牛双芽巴贝斯虫巢式PCR方法准确、敏感、特异,可以用于牛双芽巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。
- 简子健马素贞孙其吉吉沈炯玉苗中秋吕伟
- 关键词：巢式PCR
- 新疆牛双芽巴贝斯虫病的流行病学调查被引量：5
- 2012年
- 本研究使用牛双芽巴贝斯虫HSP20(exon)-iELISA检测方法,对2006-2008年新疆14个地州市的牛双芽巴贝斯虫病流行病学进行了调查。结果显示:(1)新疆存在着牛双芽巴贝斯虫病,且比牛巴贝斯虫病严重。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清11份,感染率为5.40%。2007年的532份牛血清样品中检出阳性血清25份,感染率为4.70%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清53份,感染率为7.17%;(2)2008年,发病疫区内牛双芽巴贝斯虫感染率高达30%;(3)牛双芽巴贝斯虫感染的地州市由2006年的8个扩大到2008年的13个;(4)新疆牛双芽巴贝斯虫病的感染率逐年上升,疫区面积不断扩大,流行区内感染率激增。这是新疆首次利用血清学方法对全疆范围内牛双芽巴贝斯虫病进行大规模的流行病学调查。
- 简子健马素贞孙其喆沈炯玉吕伟苗中秋
- 关键词：双芽巴贝斯虫流行病学调查感染率
- 新疆牛巴贝斯虫MSA-2c可溶性融合蛋白的高效表达被引量：1
- 2009年
- 为了提高新疆牛巴贝斯虫MSA-2c融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,研究了不同表达条件对蛋白表达量的影响,包括温度、诱导时间以及诱导剂(IPTG)浓度等。结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养约2.5 h后,添加终浓度为1 mmol/L的IPTG,在27℃振荡培养8 h时,GST-Tamsl融合蛋白表达量最高,达到3.2mg/mL。用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对CST-MSA-2c融合蛋白进行纯化,SDS-PACE检测表明GST-Tamsl融合蛋白大小约为55 KD,与预期的分子量大小一致。MSA-2融合蛋白的优化表达为牛巴贝斯虫病的分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 简子健沈炯玉马素贞苗中秋孙其喆吕伟
- 关键词：牛巴贝斯虫
- 牛双芽巴贝斯虫新疆株HSP20基因的克隆和真核表达质粒的构建被引量：2
- 2009年
- 通过设计牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白HSP20基因序列的特异性引物,采用PCR方法从疑似"牛焦虫病"的患牛全血基因组中扩增得到699 bp的HSP20基因,将其连入pMD18-T测序、鉴定,再将验证的699 bp的HSP20基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核载体PCDNA3.1-HSP20。经再次测序、鉴定后,尾静脉注射小白鼠进行HSP20基因的瞬时表达,取其肝脏提取总RNA,经RT-PCR方法扩增出一条534bp的目的条带,表明真核表达质粒构建成功。
- 简子健孙其喆马素贞王晓萍
- 关键词：PCDNA3.1(+)真核表达
- 牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exon)融合蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2010年
- 【目的与方法】以纯化的牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exons)融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了检测牛双芽巴贝斯虫血清特异性抗体的新型间接ELISA方法。【结果】方阵试验确定的GST-HSP20抗原的最适包被浓度为5μg/mL,血清最佳稀释倍数为40倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.292,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。HSP20间接ELISA方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白建立的牛双芽巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。
- 简子健马素贞孙其喆沈炯玉苗中秋吕伟
- 牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学诊断方法的建立被引量：4
- 2011年
- 【目的与方法】在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进一步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法。【结果】牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA检测方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白抗原建立的牛巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。
- 简子健马素贞袁江玲沈炯玉吕伟孙其喆苗中秋
- 关键词：牛巴贝斯虫融合蛋白间接ELISA
- 新疆牛环形泰勒虫虫病的流行病学调查被引量：8
- 2011年
- 【目的】2006～2008年全疆14个地州的牛环形泰勒虫病流行病学调查。【方法】使用已建立的牛环形泰勒虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-Tams1作为抗原。【结果】(1)牛环形泰勒虫病仍是新疆牛梨形病的主要病原。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清31份,感染率为11.15%。2007年,在532份牛血清样品中检出阳性血清61份,感染率为11.47%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清61份,感染率为11.51%。(2)2008年,在地方流行性疫病区牛环形泰勒虫感染率高达24%。【结论】新疆牛环形泰勒虫病的特点是疫区分布广,感染率居高不下,保持在11%以上,对动物和人类构成一定的威胁。这是新疆首次利用血清学方法对全疆牛环形泰勒虫病进行大规模的流行病学调查。
- 简子健马素贞孙其喆沈炯玉吕伟苗中秋
- 关键词：环形泰勒虫流行病学调查感染率
- 牛巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank发表的XJ-MSA-2c核苷酸序列(登录号:EU328267)设计的2对特异性引物MS-1、MS-2、MS-3以及MS-4,建立牛巴贝斯虫病巢式PCR快速检测方法。在特异性检测试验中,仅从MSA-2c质粒样本中扩增出622、350bp2条目的片段,与预期片段大小相符,而作为对照样本的双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫、东方巴贝斯虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。第1次和第2次扩增的敏感性分别为1.75、1.75×10-2μg/L。在对46份全血的DNA样本巢式PCR和显微镜检测中,阳性检出率分别为34.8%(16/46)和23.9%(11/46)。结果表明,所建立的巢式PCR方法准确、敏感、特异,作为牛巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。
- 简子健马素贞沈炯玉
- 关键词：牛巴贝斯虫巢式PCR
