江苏省自然科学基金(BK2010104)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：南京大学医学院附属鼓楼医院南京大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- PEI-质粒纳米粒子对体外培养新生C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜转染效果观察被引量：2
- 2014年
- 目的观察以25kDa线性聚乙稀亚胺(linear plyethylenimine,L-PEI)和分枝PEI(branched PEI,B-PEI)作为表达绿色荧光蛋白的质粒pEGFP-C1的载体,转染体外培养新生C57BL/6J小鼠基底膜的效果。方法25kDa线性或分枝PEI与质粒在5%葡萄糖溶液或PBS溶液中形成纳米粒子后,行透射电镜观察纳米粒子表征;按相同方法制备纳米粒子,行凝胶阻滞实验并在培养的293T细胞中行MTT毒性测试,选择毒性较小的PEI类型作为质粒载体在293T细胞检测其转染效果;以最适条件用其转染体外培养新生C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜并行荧光镜观察。结果在相同条件下,B-PEI转染能力略强于L-PEI,但L-PEI毒性明显低于B-PEI;在PBS中制备的L-PEI-pDNA纳米粒子的毒性小于在葡萄糖溶液中制备的该粒子毒性;L-PEI-pDNA纳米粒子在适宜浓度范围可以转染体外培养新生小鼠耳蜗基底膜的螺旋缘纤维细胞、螺旋神经元、支持细胞,但转染效率不高。结论 L-PEI可作为转染新生小鼠耳蜗基底膜细胞的非病毒载体,但需要进一步优化获得更好的转染效果。
- 刘永泽周函钱晓云朱光洁罗熠李奇峰陈杰马登滨高下
- 关键词：非病毒载体基因转染耳蜗小鼠
- PET滤膜用于承载耳蜗基底膜培养的实验研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨一种适宜耳蜗组织贴壁培养的方法。方法 PET滤膜预先置入层粘连蛋白、鸟氨酸、胎牛血清按2:2:1比例混合均匀的液体中在4℃预孵过夜,选取出生四天的C57BL/6J小鼠作为研究对象。剥取基底膜以PET滤膜作为承载介质培养在加入含青霉素的培液中,48小时后收取样本,进行免疫荧光(一抗goat anti-otoancorin、mouse anti-beta tubu-linⅢ及对应二抗采用cy3 donkey anti goat,647 donkey anti mouse,染核试剂DAPI,phalloidin)观察不同部位细胞,扫描电镜及制备原位超薄切片透射电镜观察体外培养新生小鼠基底膜内外毛细胞、螺旋缘内细胞、螺旋神经元细胞显微结构的改变。结果耳蜗基底膜在PET膜上贴附生长良好。各种细胞的微小结构和超微结构保持正常状态。结论 PET滤膜能作为一种新颖的承载基底膜培养的介质。
- 刘永泽周函麻晓峰马登滨高下
- 关键词：毛细胞免疫荧光透射电镜
