国家科技支撑计划(2008BAK41B03)
- 作品数：2 被引量：31H指数：2
- 相关作者：赵耀康琳王景林郑学礼苏裕心更多>>
- 相关机构：南方医科大学军事医学科学院北京化工大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 数字PCR测定DNA含量及测量结果不确定度评定被引量：11
- 2013年
- 数字PCR是一项不依赖校准物的DNA绝对定量技术,将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的微室中并且进行扩增反应,通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。采用数字PCR技术对噬菌体λDNA的含量进行测定,并对测定结果进行不确定度评定。结果显示,由数字PCR测得的λDNA的含量为(2.43±0.35)μg/管(k=2),该结果与同位素稀释质谱法测量结果相吻合。
- 柳方方张玲王晶陈大舟臧超于笑波秦培勇
- 关键词：DNA含量不确定度
- 荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立被引量：20
- 2010年
- 目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC。用SAU6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能。结果以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50cfu/ml。建立的定量标准曲线的循环域值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2≥0.998),PCR效率E≥96.7%。用SAU6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×102cfu/25ml样本。结论所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量。
- 苏裕心高姗康琳赵耀郑学礼王景林
- 关键词：金黄色葡萄球菌实时定量PCR病原体检测牛奶
