广东省科技攻关计划(2006B13001006)
- 作品数：8 被引量：44H指数：3
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- 发文基金：广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 茂原链霉菌原生质体制备条件的优化被引量：13
- 2008年
- 对茂原轮枝链霉菌(Streptoverticilluim mobaraense)的原生质体制备进行了研究。研究表明在培养基中加入4%的甘氨酸有利于原生质体的释放。茂原轮枝链霉菌孢子悬液在41℃下用2.5mg/mL溶菌酶作用4h的效果最好,原生质体形成率与再生率的乘积可达24%。
- 包莹玲潘力
- 关键词：原生质体响应面法
- 深黄被孢霉和拉曼被孢霉多不饱和脂肪酸代谢的研究
- 2007年
- 应用气相色谱-质谱联用技术对国内和国外两株γ-亚麻酸(GLA)的主要生产菌(深黄被孢霉和拉曼被孢霉)的脂肪酸成分进行分析,然后从不饱和脂肪酸的代谢途径和菌体的生理特性对两株菌进行比较。从代谢途径看,两株菌的不饱和脂肪酸代谢有一定的差异,其中△6-和△12-脂肪酸脱氢酶均为阻碍两株菌高产GLA的关键所在,再结合两株菌的生理特性,发现拉曼被孢霉较深黄被孢霉更适合工业化生产。
- 李莉莉潘力罗立新林影
- 关键词：被孢霉Γ-亚麻酸
- 微生物谷氨酰胺转胺酶作用机制及检测方法研究进展被引量：13
- 2008年
- 微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)在食品、医药、生物技术等领域具有优良的品质及广泛的应用前景。本文简要介绍了MTG的结构、作用机理以及目前国内外检测方法的原理。并对检测方法的适用性、优缺点进行适当评述。随着MTG应用的日益广泛,对其活性的检测要求也在不断地提高。建立其安全、准确、灵敏度高、重现性好的检测体系日益成为研究的热点。
- 包莹玲潘力
- 转谷氨酰胺酶酶原在枯草芽孢杆菌WB800中的表达被引量：3
- 2011年
- 以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)基因组DNA为模板,PCR扩增得到转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-transglutaminase,pro-TG),经pMD18-T载体亚克隆到表达载pBEp43(+),然后转化到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB800中,经过32 h摇瓶发酵,成功表达了转谷氨酰胺酶酶原。采用胰蛋白酶激活转谷氨酰胺酶酶原,成功切除前导肽后得到成熟的转谷氨酰胺酶。牛血清蛋白(BSA)交联表明成熟的转谷氨酰胺酶具有蛋白交联的功能。本研究首次采用枯草芽孢杆菌作为宿主分泌表达了茂原链霉菌的转谷氨酰胺酶酶原,对基因工程异源表达这种特殊的食品用酶提供了新思路。
- 罗宁杨慧林沈徐凯郑明英
- 关键词：枯草芽孢杆菌分泌表达
- 基于基因组改组的米曲霉沪酿3.042多亲株PEG介导融合育种被引量：8
- 2008年
- 利用经过分生孢子的原生质体紫外线-氯化锂、NTG复合诱变得到的米曲霉沪酿3.042的8株突变株作为候选株文库,采用基因组改组(genome shuffling),利用原生质体,进行多亲株双灭活PEG介导融合,优化融合条件。以酪蛋白平板初筛,以及固体发酵测定中性蛋白酶酶活复筛,通过2轮融合操作,筛选出6株高产中性蛋白酶的融合株。其中融合菌株FII-41酶活达到7412U/g(干基),比原始出发菌株4212U/g(干基)提高1.76倍,且遗传稳定。
- 潘力梁燕嫦苗小康胡杰
- 关键词：中性蛋白酶基因组改组
- 转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的重组优化表达被引量：2
- 2012年
- 茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)转谷氨酰胺酶酶原(pro-transglutaminase,pro-TG)在重组大肠杆菌中的表达量低,限制了其在食品、化妆品、纺织行业中的应用。通过对转谷氨酰胺酶酶原的基因序列进行密码子优化,降低其GC含量,提高了它在大肠杆菌中的表达水平,结果表明经优化后转谷氨酰胺酶原的表达量达到了优化前的4.4倍。为提高转谷氨酰胺酶的比活力,通过基于融合PCR的定点突变技术将转谷氨酰胺酶第二位的丝氨酸突变为脯氨酸,突变后转谷氨酰胺酶的比活力达到了突变前的1.26倍。上述研究结果表明,密码子优化及定点突变技术可以应用于优化转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的表达。
- 王坤杨慧林王斌潘力
- 关键词：密码子优化定点突变大肠杆菌
- 片段化全基因组体外诱变选育转谷氨酰胺酶高产菌株的研究被引量：3
- 2009年
- 茂原链霉菌产生的转谷氨酰胺酶由于具有使蛋白质交联的特性而备受关注,但是其较低的产量阻碍了工业化的发展。本文采用一株分离到的茂原链霉菌作为出发菌株,通过片段化全基因组体外诱变育种的方法,最终得到一株转谷氨酰胺酶酶活为0.223U/mL的优良菌株,比出发菌株(0.0685U/mL)酶活提高近2.23倍。
- 杨慧林包莹玲潘力
- 关键词：育种转谷氨酰胺酶
- 丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原被引量：2
- 2011年
- 以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)的基因组DNA为模板,PCR扩增出转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-trans-glutaminase,pro-TG)),PCR产物连接到pMD18-T克隆载体后亚克隆到表达载体pET-22b(+),转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经IPTG诱导后,转谷氨酰胺酶酶原(pro-TG)主要以可溶性蛋白表达。菌体离心后用丙酮高速搅拌破碎细胞,亲和层析成功地纯化到了转谷氨酰胺酶酶原。转谷氨酰胺酶酶原经胰蛋白酶切割激活后其酶活为502.8 U/g CDM(菌体干重)。采用BSA交联试验证实成熟的转谷氨酰胺酶(TG)具有功能。采用丙酮破碎法提取重组大肠杆菌表达的转谷氨酰胺酶酶原对大规模工业化生产转谷氨酰胺酶进行了有益的探索。
- 沈徐凯周斌王云艳王斌杨慧林潘力
- 关键词：纯化
