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菌种保藏方法对裂殖壶菌生长及发酵性能的影响: 2014年; 考察保护剂、保藏温度及预冷冻方法对Schizochytrium sp.HX-308菌种存活率及发酵性能保持的影响。结果显示:在-80℃低温保藏6个月后,渗透性保护剂的细胞存活率均比非渗透性保护剂高了5%,其中用60%(质量分数)海藻糖的保护剂最终的株细胞存活率达到80.02%,明显优于其他保护剂。采用液氮-196℃保藏菌种(两步预冷冻法、60%海藻糖保护剂),存储6个月后存活率高达90.70%,生物量、油产量和二十二碳六烯酸(DHA)产量分别达到了61.65、26.41和11.10 g/L,为最优的保藏方法,为裂殖壶菌的实验室研究及工业化生产提供了一种长期安全的保藏法。; 胡学超张丽任路静纪晓俊黄和; 关键词：裂殖壶菌 DHA 菌种保藏保护剂

裂殖壶菌发酵产DHA过程呼吸参数的在线检测分析被引量：3: 2013年; 利用尾气分析仪对发酵过程的尾气中的O2、CO2含量进行实时检测,建立了裂殖弧菌发酵生产DHA过程中的呼吸参数在线检测方法,实现了裂殖壶菌补料分批发酵过程及双阶段供氧控制发酵过程中的呼吸参数在线检测分析。通过呼吸参数在线检测分析,从氧消耗机制方面解释了双阶段氧传递控制工艺能获得较高生物量、油脂和DHA含量的原因,从而为该工艺过程提供了理论指导。根据发酵过程中菌体生长不同时期的呼吸参数的变化情况,建立了基于呼吸商变化的在线补料控制方法,设计了一种基于RQ-Stat的补料工艺。RQ-Stat补料方式最终获得的油脂含量、DHA产量和产率比间歇式补料工艺分别提高了11.58%、12.19%和11.40%。; 瞿亮任路静黄和; 关键词：DHA 裂殖壶菌

种子培养基成分对裂殖壶菌发酵产DHA的影响被引量：3: 2013年; 考察种子培养基中谷氨酸钠质量浓度和NaCl质量浓度(盐度)对Schizochytrium sp.HX-308菌种质量及发酵性能的影响。结果表明:40 g/L谷氨酸钠条件下培养菌种,发酵后DHA质量分数达到(53.25±0.48)%,而其油产量、油脂质量分数和DHA产量分别为(24.9±0.4)g/L、(45.2±0.6)%、(8.6±0.35)g/L;利用不含谷氨酸钠的种子培养基发酵,其油产量、油脂质量分数和DHA产量分别为(30.1±0.8)g/L、(54.3±0.5)%、(12.1±0.5)g/L,比含40 g/L谷氨酸钠时分别提高了20.88%、20.13%和40.70%,为菌种驯化提供了新的思路和方向。此外,低盐度培养条件有利于菌种生产性能的发挥,6.25 g/L NaCl条件下发酵后油质量分数、DHA产量及DHA质量分数最高,分别为(62.1±0.8)%、(10.0±0.3)g/L、(48.97±0.42)%。; 冯云任路静瞿亮纪晓俊黄和; 关键词：裂殖壶菌 DHA 菌种培养

基于同源重组的裂殖壶菌遗传转化体系的构建及验证: 2015年; 【目的】裂殖壶菌是一种能高效生产DHA的海洋真菌;基因工程技术已经成功应用在微生物改造和代谢机理研究中,利用基因工程技术对裂殖壶菌进行改造首先需要构建适合裂殖壶菌的遗传转化体系;【方法】本文利用电转化的方法将含有18S r DNA同源重组片段的ble基因导入裂殖壶菌中,通过zeocin抗性平板筛选出阳性菌株,并设计ble基因引物,以裂殖壶菌基因组为模板,进行PCR验证ble基因是否成功结合到裂殖壶菌染色体上。【结果】筛选获得的抗性菌株基因组上确实PCR出ble基因片段,对改造菌株与原始菌株进行发酵培养,发现改造后菌株在生物量、油脂含量、DHA含量及脂肪酸分布等方面和原始菌株基本一致。【结论】抗性基因的插入不会影响菌株的正常代谢,该体系的构建为后续其他外源基因导入奠定基础。; 庄小燕陈胜兰纪晓俊徐娴任路静; 关键词：裂殖壶菌 RDNA 同源重组

气相色谱-质谱联用技术及其在代谢组学中的应用被引量：41: 2013年; 代谢组学是以高通量、高灵敏度、高分辨率的现代仪器分析方法为手段,对细胞、体液、组织中所有代谢物进行无偏向的定性与定量分析的一门学科。气相色谱-质谱联用技术具有较高的检测灵敏度和鉴定准确度,通过标准谱图库的比对可对代谢物进行快速的鉴定,因此被广泛应用于生物样品的代谢产物的检测中。文中对近年来气相色谱-质谱联用技术的发展以及在代谢组学研究中取得的成果进行了综述。首先介绍了气相色谱-质谱联用技术的分类和常用的样品衍生化方法;继而从样品预处理、定性与定量分析、数据分析三方面介绍了气相色谱-质谱联用技术分析代谢物的方法,并系统地对该技术在微生物、植物、疾病诊断领域的应用实例进行了评述;最后提出了当前气相色谱-质谱联用技术在代谢组学研究中存在的问题并对后续的研究进行了展望。; 李娟任路静孙冠男黄和; 关键词：气相色谱-质谱联用代谢组学微生物衍生化

碳、氮源对纳豆芽孢杆菌R127发酵产维生素K2的影响被引量：4: 2016年; 维生素K2是一类重要的脂溶性凝血维生素,在凝血、抗骨质疏松等方面具有重要作用。以本实验室自主筛选的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)R127发酵生产维生素K2,考察不同含量的碳源、氮源对纳豆芽孢杆菌生长、底物消耗和维生素K2合成能力的影响,并探究了维生素K2的分泌情况。结果表明,50 g/L甘油质量浓度最佳,K2产量达到15.8 mg/L;氮源浓度与生物量成反比,与维生素K2合成量呈正比;此外,在发酵过程中,一部分维生素K2以水溶性的形式分泌到细胞外,分泌率约68.8%。; 周子民罗苗苗邱宏伟王丽张绮悦任路静黄和; 关键词：维生素K2 纳豆芽孢杆菌氮源碳源

裂殖壶菌单细胞油脂的组分特性分析被引量：3: 2013年; 为了获得完整的裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)油脂组分信息,以其单细胞油脂组分为研究对象,对裂殖壶菌单细胞油脂进行深入研究。结果表明:裂殖壶菌单细胞油脂占细胞干重的63.32%;单细胞油脂由87.864%的中性脂和11.322%的极性脂组成;单细胞油脂中DHA含量为41.45%;单细胞油脂中胆固醇、角鲨烯和β-胡萝卜素含量分别为40.93、19.99 mg/g和34.91μg/g。经气相色谱-质谱联用分析表明:单细胞油脂的不皂化物中含有胆固醇、麦角固醇、豆甾醇、β-谷甾醇、环阿屯醇和角鲨烯。; 孙冠男任路静瞿亮李娟胡元维黄和; 关键词：DHA 裂殖壶菌不皂化物胆固醇

裂殖壶菌在不同氧供应条件下油脂及大分子物质迁移规律研究被引量：1: 2014年; 为研究裂殖壶菌在不同供氧条件下胞内油脂、碳水化合物、蛋白质、多糖和寡糖的迁移规律,将传统方法与傅里叶红外光谱法相结合,研究发酵过程中各物质迁移规律。结果表明:傅里叶红外光谱法是一种可信且快速的检测手段;油脂积累过程中三酰甘油(TAG)、寡糖相对含量均随时间的延长而增加;碳水化合物呈先升高后降低趋势;多糖相对含量在低供氧条件下随时间的延长而增加,高供氧条件下与之相反。此外,高供氧条件下可积累富含95.74%中性脂的油脂;低供氧条件下细胞倾向于积累极性脂、蛋白质并快速富集寡糖成分以应对不良环境。; 任路静孙丽娜庄小燕瞿亮纪晓俊黄和; 关键词：裂殖壶菌三酰甘油大分子物质供氧傅里叶红外光谱

超氧化物歧化酶、丙二醛、脯氨酸作为裂殖壶菌菌种性能评价的新指标被引量：1: 2013年; 【目的】对不同Schizochytrium sp.HX-308种子期超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和脯氨酸(Pro)进行测定,旨在寻找出一种评价菌种质量优劣的新方法。【方法】选用Schizochytrium sp.HX-308中的1株驯化高产菌株和1株原始菌株在正常条件下活化,以及同一原始菌株分别在正常条件和恶劣条件下活化的2组实验,分别通过WST-1法、巴比妥酸比色法和比色法测定SOD、MDA和Pro含量,探讨不同菌株中这3个指标与裂殖壶菌Schizochytrium sp.HX-308最终发酵性能之间的关系。【结果】发酵性能最佳的驯化菌株整个种子期的SOD、MDA和Pro含量都最低,平均仅为0.025 U/g、26.20 mmol/g.Fw和0.098 mg/g.Fw,而发酵性能最差的恶劣条件下菌株的SOD已达到了它的6倍以上,MDA和Pro也达到了2倍以上。【结论】本研究最终证实,这3个指标与菌株的发酵性能呈负相关关系,可以作为评价裂殖壶菌菌株发酵性能优劣的新指标,为菌株选育的优化提供了指导。; 张丽任路静胡元维瞿亮黄和; 关键词：裂殖壶菌超氧化物歧化酶丙二醛脯氨酸

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江苏省自然科学基金(BK2012424)

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