教育部科学技术研究重点项目(03096)
- 作品数：28 被引量：106H指数：7
- 相关作者：刘新光梁念慈林小聪陈小文陈伟珠更多>>
- 相关机构：广东医学院深圳市儿童医院广东药学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 微小RNA:一类新的调控性非编码RNA被引量：4
- 2005年
- 微小RNA(miRNA)是一种长度约为18～25nt的非编码RNA.在线虫、拟南芥、果蝇、人类等动植物细胞中已发现了近400个miRNA,这些miRNA可在转录后水平或翻译水平调节基因表达.miRNA可在无脊椎动物的发育、神经分化、细胞增殖、凋亡和脂肪代谢过程中发挥调节作用.由于与siRNA的相关性及相似的功能,miRNA已引起人们的广泛关注.
- 王菲菲刘新光梁念慈
- 关键词：微小RNARNA小分子干扰
- 藤黄菌素和山萘黄素对人白血病细胞系HL-60体外增殖的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的观察藤黄菌素和山萘黄素对HL-60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法分别采用台盼蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果应用台盼蓝拒染法,藤黄菌素和山萘黄素能显著抑制HL-60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明,藤黄菌素和山萘黄素作用2小时可使HL-60细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论藤黄菌素和山萘黄素是两种能够明显抑制HL-60细胞体外增殖,影响其细胞周期分布的黄酮类化合物。
- 林小聪刘新光陈伟珠梁念慈
- 关键词：白血病细胞系细胞周期
- 山萘黄素对人白血病细胞系HL-60体外增殖的抑制作用
- 2006年
- 目的观察山萘黄素对H L-60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果应用台盘蓝拒染法,山萘黄素能够显著地抑制H L-60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明:山萘黄素作用2h可使HL-60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论山萘黄素能够明显抑制HL-60细胞体外增殖,影响其细胞周期分布。
- 陈伟珠林小聪刘新光
- 关键词：白血病细胞系增殖细胞周期
- 1,8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
- 2005年
- 目的观察1, 8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,以寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度1, 8-二羟蒽醌对CK2活性的影响。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ32P]ATP的[32P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。1, 8-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,半数抑制浓度(IC50 )为23. 90μmol·L-1; 与ATP呈竞争性抑制CK2的活性, 抑制常数Ki值为16. 08μmol·L-1。结论1, 8 -二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。
- 李春梅刘新光林小聪陈小文梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2重组蛋白全酶蒽醌酶动力学
- 山奈酚抑制蛋白激酶CK2活性被引量：19
- 2006年
- 研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA表达水平;通过Lineweaver-Burk作图法,分析CK2的酶动力学机制.山奈酚能显著抑制重组人CK2活性(IC50=1.88μmol/L)和HL-60细胞内的CK2活性,对细胞内CK2的作用效果强于阳性对照四溴-2-氮杂苯并咪唑(TBB).山奈酚作用2h,对CK2各亚基的mRNA表达水平均没有影响.山奈酚对重组人CK2的酶动力学分析表明,山奈酚与ATP(Ki=1.14μmol/L)及酪蛋白(Ki=1.03μmol/L)均呈非竞争性抑制作用.结果提示,山奈酚是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂,其作用机制可能与其阻碍CK2与ATP以及底物的结合有关.
- 林小聪刘新光陈小文梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2山奈酚酶动力学
- 黄色黄素抑制人白血病HL-60细胞内蛋白激酶CK2的实验研究被引量：3
- 2007年
- 蛋白激酶CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点,其特异性抑制剂具有潜在的临床应用价值.通过测定药物作用后转移到CK2底物上[γ-32P]ATP的放射性活度,探讨黄色黄素对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α'和β亚基的mRNA表达水平;Lineweaver-Burk作图法分析CK2的酶动力学机制.发现黄色黄素能显著抑制重组人CK2全酶(IC50=0.86μmol/L)以及HL-60细胞内的CK2活性,其作用效果均强于阳性对照TBB.另外,黄色黄素作用2h可使CK2α和α'亚基的mRNA表达下降,对β亚基则无明显的影响.酶动力学分析表明,黄色黄素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性.研究说明,黄色黄素是一种有效的细胞内蛋白激酶CK2抑制剂.
- 林小聪刘新光阮杰陈小文梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2HL-60细胞
- 酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建被引量：3
- 2004年
- 目的 :用人蛋白激酶 CK2α'(h CK2α') c DNA片段构建酵母双杂交体系中“诱饵”载体。方法 :通过 PCR扩增已构建成功的重组质粒 p Th CKA'获得人 CK2 α'亚基编码区 c DNA,将 Pst /Nde 双酶切的 PCR产物连接到同样酶切的“诱饵”载体 p GBKT7,转化感受态细胞 DH5α获得转化子 ,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子 ,将阳性克隆进行限制性内切酶酶切与 DNA测序的方法鉴定。将 DNA测序验证的 p GBKT7- h CK2α'转染感受态酵母株 AH1 0 9,Western blot鉴定 h CK2α'蛋白表达 ,检测表达产物对报道基因的激活作用及对酵母株AH1 0 9的毒性。结果 :限制性酶切结果表明 ,插入片段和重组质粒的大小与理论值推测值相符。重组质粒 p GBKT7- h CK2α'转染的酵母株AH1 0 9中能够表达 h CK2 α'蛋白 ,p GBKT7- h CK2 α'无自主激活报道基因的能力及对酵母的生长无毒性。结论 :p GBKT7- h CK2 α'酵母双杂“诱饵”载体构建获得成功 ,可应用于酵母双杂交体系。
- 梁景耀黄功华刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2酵母双杂交PCR
- 大豆黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析被引量：1
- 2004年
- 目的 :体外观察大豆黄酮对重组人蛋白激酶 CK2的抑制效果及酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法 :利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化 ,获得重组人 CK2的 α'及 β亚基在体外等摩尔混合构成 CK2全酶 ,并测定大豆黄酮对酶的抑制作用及采用 IC50 结果的回归方程分析其动力学。结果 :大豆黄酮能显著抑制重组人蛋白激酶 CK2的活性 (IC50 =2 .38μmol/ L ) ,抑制作用明显强于已知的 CK2抑制剂 5,6-二氯 - 1 -β- D-呋喃核糖苯并咪唑 (DRB)和 N- (2 -氨乙基 ) - 5-氯萘 - 1 -硫胺 (A3)。酶动力学分析表明 ,大豆黄酮与 ATP(Ki=3.0 2 μmol/ L)及酪蛋白 (Ki=2 .2 2 μmol/ L)均呈混合型抑制 CK2的活性。结论 :大豆黄酮是一种较强的体外蛋白激酶 CK2的抑制剂。
- 林小聪刘新光陈小文陈伟珠梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2重组蛋白全酶大豆黄酮酶动力学
- 蛋白激酶CK2在细胞周期调控中的作用被引量：13
- 2006年
- 细胞周期的研究是生物生长、发育、遗传及医学等相关领域中重大问题研究的基础,其运转的分子基础是以Cyc lin-CDK-CK I为中心的细胞周期网络调控系统。蛋白激酶CK2在进化过程中是最保守的蛋白激酶之一,大量的研究表明,其在细胞周期的调控中发挥着举足轻重的作用。
- 刘振杰刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2细胞周期
- 木犀草素对蛋白激酶CK2的抑制作用被引量：5
- 2006年
- 目的观察体外以及细胞内木犀草素对蛋白激酶CK2活性的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ3-2P]ATP的32P的放射性活度,探讨木犀草素对重组人CK2全酶以及HL-60细胞内CK2活性的抑制作用,并采用L ineweaver-Burk作图法分析其酶动力学机制。结果木犀草素能显著抑制重组人CK2活性(IC50=0.86μmol.L-1)以及HL-60细胞内的CK2活性,其对细胞内CK2的作用效果要强于阳性对照TBB。酶动力学分析表明,木犀草素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19μmol.L-1),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11μmol.L-1)。结论木犀草素是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。
- 林小聪刘新光陈小文陈伟珠梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2木犀草素酶动力学
