国家自然科学基金(81172363)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：陕西省人民医院西安交通大学医学院第一附属医院内布拉斯加大学更多>>
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- DNA结合蛋白A在结直肠癌组织和细胞中的表达及其临床意义被引量：3
- 2015年
- 目的 研究DNA结合蛋白A（dbpA）基因在结直肠癌组织和细胞中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌患者癌组织及癌旁正常结直肠黏膜组织中dbpA蛋白的表达,采用免疫荧光及反转录PCR法检测结直肠黏膜上皮细胞系FHC、人结直肠腺癌细胞系SW480、RKO、SW620、DLD-1、HT-29、SW1463及患者癌组织、癌旁组织中dbpA mRNA表达,Western blot法检测结直肠癌组织及细胞中蛋白的表达变化.结果 在正常结直肠组织中dbpA蛋白和mRNA无表达或低表达,在结直肠癌组织中dbpA表达明显增高.结直肠癌中dbpA mRNA阳性表达率升高,分别为80.0％（48/60）、10.0％（6/60）,dbpA蛋白阳性表达率升高,分别为83.3％（50/60）、10.0％（6/60）,差异均有统计学意义（P＜0.01）.在FHC细胞中dbpA无表达,在6株结直肠癌细胞中,dbpA不同程度高表达（P＜0.05）.dbpA高表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移、组织学分型及脉管侵犯相关（P＜0.05）,dbpA高表达组预后较差（P＜0.05）.结论 dbpA的升高可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用,可能是结直肠癌的一个预后指标。
- 刘瑞廷王国荣邱健王小强阎立昆李小军刘昌
- 关键词：结直肠肿瘤免疫组织化学反转录聚合酶链反应
- 基于芯片技术探讨结直肠癌中沉默DNA结合蛋白A的基因表达谱分析被引量：1
- 2022年
- 目的基于基因芯片技术探讨短发夹RNA沉默人结直肠癌细胞DNA结合蛋白A(dbpA)表达后利用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析发现与dbpA相关的结直肠癌发生、发展的信号通路。方法选取结直肠癌SW620细胞中表达差异的基因进行深度检测和分析,采用基因芯片技术挖掘差异基因,并运用定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)对芯片结果进行验证,综合分析工具进行GO功能富集分析及KEGG信号通路分析。结果dbpA敲低后基因芯片检测差异表达基因有578条,其中181个基因上调,397个基因下调,显著上调基因有CFL2、C12orf39、EREG、SESN2、CXCL3、CXCL1、VLDVR、DDIT4、INHBE等60个基因,显著下调基因在PRDM10、PCDH19、SRSF8、FGFBP1、TFF2、MTDH、TCF7、EHHADH、WDR77、CEACAM6等60个基因。dbpA敲除后SW620细胞中与肿瘤形成有关的通路主要与“生物过程”有关,包括丝裂原活化蛋白激酶信号通路、癌症途径、NOD样受体信号通路、趋化因子信号通路、粘着斑、基底细胞癌、Wnt信号通路等。基因网络图分析显示有10个基因表达水平下降(FASLG、PDGFA、FGF18、MAP3K7、FGF3、CSDA、NF1、RAP1A、HSPA1A、LAMTOR3等),4个基因表达水平上升(DUSP5、PRAS2、CDC42、DUSP2等),dbpA与MAPK信号通路相关性最大。选择KMAPK信号通路中的5个相关基因即RAPIA、TAK1(MAP3K7)、DUSP5、CDC42、ZAK进行Western blot验证表明,DUSP5表达水平明显上调(P<0.05),RAP1A、TAK1、ZAK表达水平下降,RAP1A、TAK1表达水平下降明显(P<0.05)。dbpA可能通过MAPK通路调节结直肠癌细胞的发生。结论dbpA参与调控的靶基因和信号通路可能为MAPK相关通路,还需要进一步在多细胞和动物实验中研究揭示dbpA下调通路之间的关系及CDC42在结直肠癌发展中的作用。
- 刘瑞廷田利飞王国荣刘昌白继蓉邱健闫立昆李小军王小强
- 关键词：基因芯片结直肠癌基因表达
- 硫化氢调控BDNF-TrkB通路诱导HepG2细胞阿霉素耐受性被引量：1
- 2013年
- 目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对HepG2细胞阿霉素(adriamycin,ADM)耐受性产生的促进及其机制。方法以NaHS为H2S的供体,体外培养HepG2细胞,CCK-8法检测ADM对HepG2细胞的IC50值,碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测HepG2细胞脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达。结果 NaHS(100、200、400μmol·L-1)预处理HepG2细胞30 min能呈浓度依赖性地升高ADM处理72 h后对HepG2细胞的IC50值;200μmol·L-1NaHS预处理HepG2细胞30 min能明显降低0.32 mg·L-1ADM处理24 h后对HepG2细胞凋亡的诱导作用;NaHS(100、200、400μmol·L-1)作用HepG2细胞24h后,细胞BDNF的表达量明显增加;10 nmol·L-1BDNF受体(酪氨酸激酶受体B,tropomyosin-relatedkinase B,TrkB)阻断剂(K252a)预处理30 min可明显降低200μmol·L-1NaHS对HepG2细胞ADM IC50的增强作用和对ADM(0.32mg·L-1,24 h)诱导细胞凋亡的抑制作用。结论 H2S可促进HepG2细胞ADM耐受性的产生,其机制可能与其上调BDNF-TrkB通路有关。
- 黄圣旺银晓刚董琳
- 关键词：硫化氢HEPG2细胞
- HB-EGF蛋白在胃癌组织和人胃癌细胞系中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的:研究HB-EGF蛋白在胃癌组织和多个胃癌细胞系中的表达及其与胃癌发生的相关性。方法:免疫印迹和免疫荧光法检测新鲜胃癌组织和不同胃癌细胞系中HB-EGF蛋白的表达。结果:在癌旁正常胃黏膜中,HB-EGF蛋白表达较低,而在胃癌组织中,蛋白表达明显升高(P<0.05);在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中,未检出HB-EGF蛋白的表达,而在4种人胃癌细胞系中,HB-EGF蛋白表达均为阳性(P<0.01);其中SGC7901和MKN45中的表达强于BGC823和MKN28中的表达。结论:HB-EGF蛋白在胃癌组织和多种胃癌细胞系高表达,其表达水平升高可能与胃癌的发生和发展相关。
- 王国荣王小强车向明邱健郑焱刘瑞廷何文宪潘承恩
- 关键词：胃癌免疫印迹免疫荧光
- 慢病毒载体介导的dbpA基因沉默对结直肠癌细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2019年
- 目的探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)沉默DNA结合蛋白dbpA基因对大肠癌细胞生物学行为的影响。方法实验分为3组:siRNA-dbpA慢病毒干扰组、非特异性序列组和空白对照组。制备siRNA-dbpA慢病毒表达载体,转染SW620后,采用RT-PCR法对细胞中dbpA mRNA表达水平进行分析,Western blot检测SW620细胞的dbpA蛋白表达水平。采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,并检测细胞克隆形成能力。通过裸鼠移植瘤实验观察沉默dbpA后SW620细胞在体内成瘤能力。结果siRNA-dbpA显著下调了 SW620细胞中dbpA的表达,所构建的重组慢病毒有较高的基因沉默效率。siRNA-dbpA组的dbpA表达水平下调。各组的细胞凋亡率分别为26. 6%±0. 38%,12. 54%± 0. 25%和4. 46%± 0. 19%,siRNA-dbpA组高于其他两组,差异有统计学意义(F = 28. 159,P <0.01);各组的细胞增殖第5天吸光度值分别为(0. 194 ±0. 037),(0. 814 ± 0. 043)、( 1.625 ±0.061), siRNA-dbpA 组低于其他两组,差异有统计学意义(F = 23.214,P<0.01);细胞克隆数分别为(37±3)、(64±5)和(175 ±10)个,siRNAdbpA组低于其他两组,差异有统计学意义(F = 40. 254,P <0. 01)。siRNA-dbpA组裸鼠移植瘤体积在14.21,35 d后与非特异性序列组和空白对照组相比差异均有统计学意义(F= 38. 256、40. 241、30.257,均P<0.05)。结论以dbpA为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株SW620中的dbpA表达,显著增加细胞的凋亡,降低了细胞的增殖克隆能力。dbpA沉默后对活体肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用。
- 刘瑞廷侯亚莉吴向天王国荣刘昌白继荣邱健闫立昆李小军王小强
- 关键词：DNA结合蛋白质类
- 稳定表达DNA结合蛋白A慢病毒载体的构建及其对大肠癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 观察慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）沉默DNA结合蛋白A（dbpA）基因对大肠癌细胞株SW620增殖的影响,探讨该基因的作用.方法 实验分为3组：慢病毒干扰组（shRNA-dbpA组）、非特异性序列组（CON组）和空白对照组（NC组）.制备dbpA-短发卡RNA（shRNA）慢病毒表达载体,聚合酶链反应（PCR）筛选阳性克隆,测序鉴定.转染SW620细胞48h后,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法对细胞中dbpA mRNA表达水平进行分析,Western blot检测SW620细胞的dbpA蛋白表达水平;同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率,并检测细胞克隆形成能力.结果 PCR和测序证实,成功构建shRNA-dbpA病毒表达载体,shRNA-dbpA显著下调了SW620细胞中dbpA的表达,所构建的重组慢病毒有较高的基因沉默效率,Western blot检测结果表明shRNA-dbpA组的dbpA表达水平下调.流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为（26.60±0.38）％、（1 2.54±0.25）％和（4.46±0.19）％,shRNA-dbpA组显著高于其他两组（P＜0.01）,且G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞增多（P＜0.05）;MTT法检测结果显示各组的增殖第5天吸光度值分别为1.183±0.226、5.295±0.282和10.207±0.383,shRNA-dbpA组显著低于其他两组（P＜0.01）;细胞克隆数分别为（37±3）、（64±5）和（175±10）个,shRNA-dbpA组显著低于于其他两组（P＜0.01）.结论 以dbpA为靶标的RNA干扰能下调大肠癌细胞株SW620中的dbpA表达,显著增加细胞的凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,降低了细胞的增殖克隆能力.
- 刘瑞廷王国荣邱健阎立昆李小军王小强刘昌
- 关键词：慢病毒SW620细胞
