江苏省科技支撑计划项目(BE2008340)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：房耀维王淑军吕明生秦松刘红飞更多>>
- 相关机构：淮海工学院江苏省海洋资源开发研究院中国科学院烟台海岸带研究所更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目江苏省科技支撑计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶Asp186定点突变对酶活性的影响被引量：1
- 2012年
- 为确定超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶(TSA)中特定氨基酸及所在位点与酶活性间的关系,以含TSA基因的pEt-28a-His6质粒为模板,利用定点突变技术,将第186位点的天冬氨酸(Asp)突变为天冬酰胺(Asn),突变子转化至E.coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后的酶活性,定点突变后的TSA无酶活性;采用DNAStar和Deepview蛋白分析软件,预测突变前后TSA蛋白的二级结构和三级结构,结果表明Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶的186位点对维持TSA的酶活性具有重要意义,它的突变导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变。
- 吕明生杨帆胡建恩房耀维焦豫良王淑军刘姝
- 关键词：Α-淀粉酶定点突变酶活性
- 热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究被引量：3
- 2011年
- 通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50 KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K+,Sr2+,Mg2+,Na+对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2+,Pb2+,Hg2+,Zn2+,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。
- 王淑军吕明生秦松陆兆新房耀维邓祥元林谦刘红飞
- 关键词：基因克隆酶学性质
