国家自然科学基金(81172371)
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
- 相关作者：郑华川赵爽勾文峰杨雪峰郑鑫更多>>
- 相关机构：中国医科大学辽宁医学院附属第一医院承德医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 电动冻结破碎法提取组织蛋白和RNA的实验观察被引量：2
- 2014年
- 随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，检测肿瘤组织中mRNA和蛋白的表达有助于揭示肿瘤的发生、分子机制和寻找相关分子标志物。转录水平上可利用RT—PCR或cDNA芯片技术检测基因表达、转录组改变以及克隆肿瘤相关基因。蛋白水平上可利用Western blot法、2D电泳和飞行质谱技术检测肿瘤组织中蛋白表达和蛋白质学改变。这对提高检测敏感度和增加结果可信性，获得高质量RNA或蛋白样品十分关键。
- 赵爽勾文峰杨雪峰宋来郑华川
- 关键词：冷冻粉碎WESTERNBLOT蛋白RNA
- 胃癌组织芯片快速制备及Reg Ⅳ编码产物检测被引量：3
- 2014年
- 目的:建立快速胃癌组织芯片(tissue microarray,TMA)制作方法,探讨其在RegⅣ编码产物检测和研究中的应用。方法:收集日本富山大学医学部1993-04-20-2010-11-29胃癌石蜡标本372例和相应癌旁黏膜标本(距离癌组织>4cm)198例,应用AZUMAYA芯片机构建48阵列组织芯片,利用免疫组化和原位杂交检测RegⅣ蛋白和mRNA的原位表达。在Olympus BX41显微镜下选定切取部位,利用2mm的穿刺针切除供体蜡块,不用制备受体蜡块,直接将切除组织放入金属包埋皿的固定盒上制备48阵列芯片。结果:组织芯片经HE染色确定了组织病理学诊断,免疫组化和原位杂交均发现在肠上皮化生和黏液分泌性肿瘤细胞质中存在RegⅣ蛋白和mRNA表达。胃黏膜肠化生中RegⅣ蛋白表达为100%(63/63),高于胃炎的29.0%(27/93,χ2=73.67,P<0.001)、腺瘤的85.7%(36/42,χ2=9.54,P<0.005)和胃癌的45.2%(168/372,χ2=65.06,P<0.001)。胃癌组织中,印戒细胞癌阳性率为95.3%(41/43),高于低分化癌的27.4%(32/117),χ2=55.89,P<0.001。原位杂交发现,癌旁黏膜肠化生上皮细胞中RegⅣmRNA表达阳性率为95.2%(40/42),高于癌旁正常黏膜的38.6%(17/44,χ2=30.63,P<0.001)和胃癌的20.3%(14/69,χ2=55.74,P<0.001)。结论:制备TMA不需要制备受体蜡块,提高了TMA制作速度。异常RegⅣ表达与胃黏膜肠化生-球样异型增生-印戒细胞癌的发生途径关系密切。
- 陈说勾文峰牛哲峰赵爽郑鑫赵杨高野康雄郑华川
- 关键词：胃肿瘤组织芯片原位杂交免疫组织化学
- 胃癌组织及细胞株细胞骨架蛋白Fascin-1表达临床意义分析被引量：5
- 2014年
- 目的:分析胃癌组织及细胞株中Fascin-1蛋白表达的临床病理及预后意义。方法:从日本理化研究所获得胃癌细胞株MKN28、AGS、MKN45和KATO-Ⅲ。收集日本富山大学医学部1993-02-01-2006-10-01胃癌组织455例。利用实时PCR、蛋白质印迹法杂交或免疫组化检测胃癌细胞株(MKN28、AGS、MKN45和KATO-Ⅲ)和胃癌组织中Fascin-1mRNA和蛋白的表达,分析胃癌组织中Fascin-1蛋白表达与临床病理特征和预后的关系。结果:Fascin-1蛋白主要定位在胃癌细胞株的细胞质中,在MKN28和MKN45细胞株中呈强表达,在AGS和KATO-Ⅲ细胞中弱表达。胃癌组织中Fascin-1mRNA表达水平显著高于癌旁正常黏膜组织,t=5.267,P<0.001;Fascin-1蛋白表达与胃癌肿块大小(rs=0.116,P<0.001)、侵袭深度(rs=0.177,P<0.001)、淋巴管侵袭(rs=0.190,P=0.005)、静脉侵袭(rs=0.131,P=0.003)、淋巴结转移(rs=0.141,P=0.013)和TNM分期(rs=0.174,P<0.001)呈正相关。Cox风险比率回归模型显示,年龄(P<0.001)、侵袭深度(P<0.001)、淋巴管侵袭(P<0.001)、淋巴结转移(P<0.001)、TNM分期(P<0.001)和Lauren分型(P=0.003)为独立的预后因素。结论:Fascin-1蛋白表达在胃癌细胞株的侵袭转移过程中发挥重要作用,Fascin-1蛋白表达上调参与胃癌发生和演进过程,可以作为胃癌恶性程度和预后判断的有效分子标志。
- 勾文峰杨雪峰赵爽宋来于爱鸣高野康雄郑华川
- 关键词：胃肿瘤FASCIN-1
- 晶状体自发肿瘤转基因鼠脑横截面标本制备及鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的确定JCV T抗原诱发晶状体肿瘤转基因鼠脑中肿瘤来源及路径。方法 18月龄转基因鼠麻醉后4%多聚甲醛灌流固定,EDTA脱钙颅骨软化后脑经横截制备石蜡标本并进行HE染色。免疫组化和免疫荧光确定脑组织T抗原表达。结果经过脱钙处理后颅骨组织非常软,横截后发现白色肿瘤组织蔓延至脑组织中,HE染色确定眼部和脑部白色组织均为晶状体肿瘤细胞,免疫组化和免疫荧光结果显示细胞核中存在T抗原强阳性表达。结论 JCV T抗原诱发晶状体肿瘤是经过视神经孔进入脑组织,鼠头横截面组织标本制备对研究头部肿瘤的毗邻关系和肿瘤组织在脑组织中侵袭部位极具应用价值。
- 王建平张梅英勾文峰高野康雄郑华川
- 关键词：转基因鼠T抗原
- CD147在胃肠道癌中的表达及意义被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨CD147在胃肠道癌中的表达情况和意义。方法:应用免疫组化法检测胃肠道癌(n=996)和癌旁正常黏膜(n=110)中CD147的表达情况,并分析CD147表达与胃肠道癌临床病理特征和预后的关系。结果:胃肠道癌CD147的阳性表达率明显高于正常黏膜(P<0.01)。胃肠道癌CD147的表达与年龄、肿瘤大小、静脉侵袭和淋巴管侵袭有关(P<0.05);与性别、淋巴结转移及UICC分期无关(P>0.05)。Kaplan-Meier曲线显示CD147表达与患者的预后无明显相关性(P>0.05)。结论:CD147参与胃肠道癌的发生和局部浸润,可作为反应胃肠道癌病理生物学行为的有效分子标志。
- 郑鑫郑华川赵恩宏肖丽君赵爽杨宗伟
- 关键词：胃肠道癌CD147病理学特征预后
- 胃癌组织中ATBF1蛋白的表达及临床病理意义被引量：2
- 2012年
- 目的观察胃癌发生和演进过程中ATBF1蛋白表达的作用及相关机制。方法福尔马林固定、石蜡包埋的胃癌及癌旁黏膜标本制作成组织芯片,制备4种ATBF1抗体(NT440、1-12、D1-120和AT6)后进行免疫组化反应,检测胃癌中ATBF1蛋白表达,并比较其与胃癌临床病理特征和ki-67表达的关系。结果胃癌中细胞质NT440和AT6阳性表达率低于癌旁黏膜(P<0.05),但细胞核NT440的表达与其相反(P<0.05)。老年胃癌患者中D1-120和AT6的阳性表达率高于年轻患者(P<0.05),D1-120和AT6表达与胃癌淋巴结转移或局部脉管侵袭呈正相关(P<0.05)。值得注意的是,胃癌中1-12和ki-67阳性表达水平呈正相关(P<0.05)。结论胃癌发生和演进中异常ATBF1表达及核质转位发挥重要作用,ATBF1表达通过调节细胞增殖参与胃癌局部脉管侵袭和淋巴结转移。
- 王建平勾文峰川口诚高野康雄郑华川
- 关键词：胃癌癌发生演进增殖
- 人重组WNT5a联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca-8113 细胞活性的 影响及其机制被引量：1
- 2016年
- 目的观察人重组WNT5a蛋白(rWNT5a)联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞活性的影响并初步探寻其分子机制。方法 MTT检测rWNT5a+顺铂对Tca-8113细胞增殖的影响,TUNEL法检测rWNT5a+顺铂对Tca-8113细胞凋亡的影响,Western blot检测WNT通路相关蛋白β-catenin、GSK3β、LEF-1及自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达,免疫荧光观察WNT5a表达的变化。结果 r WNT5a+顺铂组与顺铂或r WNT5a单独处理组相比,明显抑制舌癌细胞增殖并促进其凋亡(P<0.05)。舌鳞状细胞癌中顺铂组与空白对照组相比,激活了自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ(P<0.05),而r WNT5a+顺铂组与顺铂组相比,明显抑制了自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ的表达(P<0.05)。顺铂组与空白对照组相比,明显上调WNT通路相关蛋白β-catenin、GSK3β、LEF-1的表达(P<0.05)。rWNT5a+顺铂组或rWNT5a组与顺铂组相比,明显抑制了WNT通路相关蛋白β-catenin、GSK3β、LEF-1(P<0.05)。结论舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞中应用rWNT5a+顺铂比单独应用顺铂明显抑制舌癌细胞增殖并促进其凋亡,其内在机制可能与r WNT5a调控WNT通路和抑制自噬有关。
- 赵子明汪洪宇胡静张卓郑华川黄克强
- 关键词：舌鳞状细胞癌顺铂WNT通路
- 地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用
- 2012年
- 目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用。方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平。在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA。杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色。结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中。ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中。NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰。结论地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观。
- 杨雪勾文峰丁蕾肖丽君高野康雄郑华川
- 关键词：原位杂交原位PCR核酸
- 胃肠道癌Parafibromin蛋白的表达及其与临床病理特征和预后的关系研究
- 2014年
- 目的：检测胃肠道癌组织中Parafibromin蛋白的表达，并探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法选取1997年12月-2008年12月日本富山大学医学部手术切除并经病理证实为胃肠道癌的患者814例。收集所有胃肠道癌患者癌组织标本814份，同时收集胃肠道癌患者癌旁组织标本328份及腺瘤组织标本129份。采用免疫组织化学法检测胃肠道癌组织、癌旁组织和腺瘤组织中Parafibromin蛋白的表达情况；并对胃肠道癌患者进行生存分析和死亡危险因素的Cox回归分析。结果 Parafibromin蛋白表达阳性率在胃肠道癌组织中为48.9%（398/814），低于腺瘤组织及癌旁组织的78.3%（101/129）和92.7%（304/328），差异有统计学意义（χ2=189.20、47.50，P〈0.05）。Spearman等级相关分析显示，Parafibromin 蛋白表达阳性与肿瘤直径、淋巴管侵袭、淋巴结转移、UICC 分期呈负相关（ rs=-0.198、-0.134、-0.238、-0.244，P 〈0.05），与性别、年龄、静脉侵袭无相关性（ rs =0.055、0.039、-0.048，P〉0.05）。电话随访573例胃肠道癌患者，失访241例，生存时间为0.2-146.4个月，平均42.1个月。生存分析显示，Parafibromin蛋白表达阴性患者累积生存率低于Parafibromin蛋白表达阳性患者（χ2=32.60，P〈0.05）。Cox回归分析显示，年龄≥60岁〔OR（95%CI）=1.589（1.194，2.113）〕、肿瘤直径≥4.5 cm〔OR（95%CI）=1.407（1.037，1.908）〕、有淋巴管侵袭〔OR（95%CI）=1.925（1.445，2.565）〕、有淋巴结转移〔OR（95%CI）=2.621（1.867，3.679）〕、UICC分期Ⅲ-Ⅳ期〔OR（95%CI）=1.564（1.067，2.292）〕是胃肠道癌死亡的独立危险因素（P〈0.05），而Parafibromin蛋白表达阳性〔OR（95%CI）=0.611（0.463，0.806）〕是胃肠道癌死亡的保护因素（P〈0.05）。结论 Parafibromin蛋白表达降低与胃肠道癌的发生、侵袭和转移有关，且与胃肠道癌患者的预后密切相关，Parafibromin蛋�
- 赵爽郑华川赵恩宏郑鑫肖丽君高野康雄
- 关键词：胃肠肿瘤病理特征预后
- JC病毒T抗原诱发肺肿瘤转基因动物模型检测
- 2014年
- 目的:利用细胞角蛋白19(K19)启动子构建胃黏膜上皮细胞中JC病毒(John Cunningham virus,JCV)T抗原表达转基因鼠,试图建立胃黏膜自发肿瘤动物模型。方法:利用限制性内切酶NdeⅠ,酶切K19-JCV T抗原表达质粒,电泳分离带有K19启动子的T抗原核酸序列后,显微注射入C57BL/6J30只小鼠受精卵中。PCR检测转基因阳性鼠,组织学观察主要脏器的形态学表现及免疫组化检测T抗原表达。结果:显微注射K19-JCV T抗原(KT)DNA片段后成功获得11种转基因阳性鼠,其中2个月龄KT7的各脏器组织学检测显示,脑、肝、肾、食管、前胃、胃、小肠、大肠、胰腺、肺、心脏和脾组织未见异常形态学改变,JCV T抗原特异表达于胃黏膜上皮细胞和支气管上皮细胞的细胞核中,16个月龄的KT7转基因鼠13.3%(2/15)出现肺肿瘤和腺癌的病理学改变,T抗原定位于癌细胞细胞核中。结论:JCV T抗原直接诱发肺肿瘤动物模型的建立为JCV T抗原嵌入所致上皮肿瘤提供了直接的实验依据,为JCV所致上皮肿瘤发生和演进分子机制奠定基础,同时为抗肿瘤药物筛选及基因治疗监控提供了良好的动物模型。
- 勾文峰赵爽宋来杨雪峰郑鑫高野康雄郑华川
- 关键词：JC病毒T抗原转基因鼠肺肿瘤
