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构建用于酵母表达的hrCEMP1真核表达载体被引量：1: 2011年; 目的:构建用于酵母表达的含hrCEMP1基因的真核表达载体。方法:采用PCR方法扩增hrCEMP1基因,利用定向克隆技术将hrCEMP1基因插入到中间载体pTeasy中,再进一步转插入载体pWX530中。重组的pWX530-hrCEMP1在大肠杆菌DH5α中扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定质粒构建是否成功。结果:酶切电泳鉴定和DNA序列测定证实重组质粒插入基因序列为hrCEMP1cDNA。结论:成功构建含hrCEMP1基因的真核表达载体pWX530-hrCEMP1,该载体可直接转入酵母表达,为大批量获得CEMP1蛋白并进行牙周组织重建研究奠定基础。; 欧伟刘玉杨建良孙卫斌杨学斌David Wood; 关键词：真核表达载体

分泌性hrCEMP1在NIH3T3细胞中的表达: 2011年; 目的:通过转基因技术建立稳定表达hrCEMP1的成纤维细胞株。方法:利用高效率的阳离子聚合物,将含有hrCEMP1编码序列的真核表达质粒pcDNA3.1-hrCEMP1转染入NIH3T3细胞中,用G418筛选获得稳定转染细胞株,以RT-PCR检测hrCEMP1基因转录,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测hrCEMP1蛋白表达。结果:转染细胞株内有hrCEMP mRNA的转录,并可检测到hrCEMP1蛋白的表达。结论:通过转基因手段,可以将外源性hrCEMP1基因成功导入成纤维细胞内,为进一步研究hrCEMP1对成纤维细胞的诱导作用建立基础。; 刘玉杨洁孙卫斌; 关键词：基因转染

采用酵母表达载体pWX530构建表达人重组牙骨质蛋白1: 2013年; 目的:构建含人重组牙骨质蛋白1(recombination human cementum protein1,rhCEMP1)基因的真核表达载体,观察其在酿酒酵母细胞中的表达。方法:采用PCR方法扩增rhCEMP1基因,利用定向克隆技术将rhCEMP1基因插入到中间载体pTeasy中,再进一步转插入载体pWX530。重组的pWX530-rhCEMP1在大肠杆菌DH5α中扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定所构建的质粒。经鉴定正确的表达载体pWX530-rhCEMP1转入酵母感受态细胞中,酵母经氨基酸营养缺陷型筛选后培养表达。利用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和酶联免疫吸附测定(ELISA)分析蛋白表达情况,离子交换层析提纯蛋白。结果:构建的重组质粒成功转入酵母细胞,通过SDS-PAGE和ELISA检测rhCEMP1表达成功。结论:成功构建的含rh-CEMP1基因的真核表达载体pWX530-rhCEMP1,并能转入酵母细胞中成功表达。; 欧伟刘玉孙卫斌杨建良Xuebin YangDavid Wood; 关键词：真核表达载体酵母

斑马鱼在牙齿发育研究中的应用被引量：1: 2010年; 斑马鱼作为一种新的模式动物,在发育研究中有广泛使用。近年来,在牙齿发育研究中也有许多报告。本文对斑马鱼牙齿形态及斑马鱼发育的分子机制研究资料作一回顾。; 杨雁刘玉孙卫斌; 关键词：斑马鱼发育

hrCEMP1真核表达载体的构建及其在成纤维细胞株中的表达被引量：1: 2010年; 目的:构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒。方法:采用PCR方法扩增hrCEMP1基因,并在两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将hrCEMP1基因插入到载体pcDNA3.1中,重组的pcDNA3.1-CEMP1在大肠杆菌DH5α内扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建成功;利用高效率的阳离子聚合物,将经过鉴定的pcDNA3.1-CEMP1转染入NIH3T3细胞中,并以RT-PCR检测hrCEMP1基因的转录。结果:通过对重组质粒pcDNA3.1-CEMP1进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达重组质粒pcDNA3.1-CEMP1构建成功,开放阅读框架正确;转染细胞株的RT-PCR结果中观察到特异性242bp片段。结论:成功构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒pcDNA3.1-CEMP1,并可在NIH3T3细胞株中mRNA水平表达。; 刘玉孙卫斌; 关键词：真核表达载体

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江苏省自然科学基金(BK2010118)