山东省自然科学基金(Y2007D10)
- 作品数：5 被引量：30H指数：3
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- 相关机构：山东省农业科学院东北农业大学四川农业大学更多>>
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- Zfb株牛源金黄色葡萄球菌生物学特性
- 2009年
- 从临床患病牛乳样内分离出的金黄色葡萄球菌β-溶血型致病菌株,命名为zfb,运用微生物学及现代分子生物学手段检测了该菌株的生物学特性,以金葡菌ATCC25923为对照株。结果表明,金黄色葡萄球菌zfb不产生脂酶,有抗药性,在改良型血清软琼脂培养基中观察荚膜形态,活体内和体外均显现散布型状态。同时,以昆明小白鼠为动物模型,测定了半数致死量和器官侵袭力。金黄色葡萄球菌牛源分离株zfb的半数致死率为10-4.33/mL,参考菌株ATCC25923菌株的半数致死率为10-2.5/mL。对牛源金黄色葡萄球菌zfb的特性检测使其成为疫苗制备的候选者,为进一步研究其致病机理及制备减毒活疫苗奠定了基础。
- 赫娜王长法杨宏军何洪彬杨少华王立群高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌半数致死量
- Zfb株牛源金黄色葡萄球菌生物学特性
- 从临床患病牛乳样内分离出的金黄色葡萄球菌β-溶血型致病菌株,命名为zfb,运用微生物学及现代分子生物学手段检测了该菌株的生物学特性,以金葡菌ATCC 25923为对照株。结果表明,金黄色葡萄球菌zfb不产生脂酶,有抗药性...
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- 关键词：金黄色葡萄球菌半数致死量
- 文献传递
- 牛源金黄色葡萄球菌突变株的筛选、鉴定及其免疫原性的研究被引量：2
- 2010年
- 【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β-溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比:其β-溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10-1.83.mL-1远低下于亲本株的10-4.33.mL-1。亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死量是未接种过的6—50倍。非亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死率是未接种过的5—60倍。【结论】突变株Hx的β-溶血素缺失,毒性减弱,对金黄色葡萄球菌攻击具有较高免疫保护性。
- 赫娜王长法杨宏军何洪彬杨少华王立群高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌MNNG突变株半数致死量
- 牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β-溶血素(hlb)的克隆、表达及溶血活性分析被引量：7
- 2009年
- 【目的】实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性。【方法】PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应。【结果】测序结果表明,扩增片段含有993bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278HU·mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103HU·mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应。【结论】成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础。此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法。
- 杨钦王长法杨宏军杨少华高运东仲跻峰彭广能
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆溶血活性
- 牛气管抗菌肽的原核表达、体外抗菌活性及其组织分布分析被引量：4
- 2010年
- 本文旨在对牛气管抗菌肽(tracheal antimicrobial peptide,TAP)基因进行原核表达,以及研究重组蛋白的抗菌活性,并分析TAP在各组织的表达分布情况,为开展转TAP基因抗乳腺炎奶牛研究提供技术资料。作者采用RT-PCR从荷斯坦奶牛气管扩增TAP基因,分析其序列后根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏好性,人工合成牛TAP基因,构建pET32a(+)-TAP重组质粒;然后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并纯化。对表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot鉴定;在线软件分析目的蛋白表达量。采用滤纸片法测定重组牛TAP的体外抗菌活性,并用RT-PCR法分析牛各组织中TAP表达情况。测序结果表明,扩增到114bp目的基因片段,可编码含38个氨基酸残基的成熟蛋白。SDS-PAGE分析表达的融合蛋白相对分子质量为24ku,重组蛋白以可溶性方式存在,表达量占菌体总蛋白的52.1%。Western Blot检测只出现单一条带。抗菌效价分析表明0.115μg·μL-1重组蛋白对牛源金黄色葡萄球菌有一定的抗菌活性。TAP基因在奶牛咽喉、肺、气管、小肠、肝、心脏及口腔黏膜中均有表达,在鼻黏膜和舌黏膜中微量表达,在皮肤中几乎不表达。作者成功表达了牛TAP基因,重组牛TAP蛋白在大肠杆菌中实现高效表达,并具有一定的抗奶牛乳腺炎致病菌的活性,为未来培育抗乳腺炎转基因奶牛及相关基因工程产品的开发奠定了基础。
- 高小艳王长法刘顺德李秋玲杨宏军杨少华仲跻峰何洪彬
- 关键词：抗菌活性乳腺炎
- 检测奶牛乳房炎主要病原菌的多重PCR方法的建立与应用被引量：17
- 2008年
- 本试验针对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌3种主要的乳房炎病原菌设计了3对特异性引物,建立了多重PCR检测方法。结果表明,本方法的特异性为100%,最低检测浓度为1.25×103cfu/mL,充分表明该方法具有快速,准确和特异的优点。
- 张善瑞王长法高运东杨少华仲跻峰赵宏坤
- 关键词：乳房炎PCR
